现代免疫学
現代免疫學
현대면역학
CURRENT IMMUNOLOGY
2005年
5期
379-383
,共5页
高跞%范华骅%陆华中%聂晓绚%龚裕春%陈波斌%刘嬿%高峰
高躒%範華驊%陸華中%聶曉絢%龔裕春%陳波斌%劉嬿%高峰
고력%범화화%륙화중%섭효현%공유춘%진파빈%류연%고봉
树突状细胞%K562细胞%总RNA%转染
樹突狀細胞%K562細胞%總RNA%轉染
수돌상세포%K562세포%총RNA%전염
探讨人的树突状细胞(dendritic cell,DC)体外经K562细胞株总RNA转染后,能否诱导出p210蛋白表达,并诱导特异性CTL,为DC疫苗的临床应用提供理论基础.自健康人浓缩白细胞制剂分离有黏附特性的单核细胞,经GM-CSF、IL-4培养5 d后,获得未成熟的DC(imDC);体外以脂质体DOTAP或直接电穿孔转染K562细胞总RNA.抽提后即时以及转染24 h后的DC内RNA进行RT-PCR检测,Western blot分析p210蛋白表达,流式细胞仪检测,以及诱导CTL杀伤K562细胞功能检测等.结果显示,RT-PCR检测表明:DC经K562细胞总RNA转染后,细胞内出现Bcr-Abl的cDNA条带,24 h后消失.Western blot实验表明:转染24 h后,开始表达p210特征性蛋白.与对照组相比,转染K562细胞总RNA的DC,在24 h后CD80、CD83、CD86、HLA-DR等表面标志均不同程度表达增高,并可促进T细胞对K562的杀伤活性.该研究从多方面角度说明应用肿瘤总RNA负载DC来制备DC疫苗的可行性,提示改良的DC疫苗抗肿瘤可能的应用前景.
探討人的樹突狀細胞(dendritic cell,DC)體外經K562細胞株總RNA轉染後,能否誘導齣p210蛋白錶達,併誘導特異性CTL,為DC疫苗的臨床應用提供理論基礎.自健康人濃縮白細胞製劑分離有黏附特性的單覈細胞,經GM-CSF、IL-4培養5 d後,穫得未成熟的DC(imDC);體外以脂質體DOTAP或直接電穿孔轉染K562細胞總RNA.抽提後即時以及轉染24 h後的DC內RNA進行RT-PCR檢測,Western blot分析p210蛋白錶達,流式細胞儀檢測,以及誘導CTL殺傷K562細胞功能檢測等.結果顯示,RT-PCR檢測錶明:DC經K562細胞總RNA轉染後,細胞內齣現Bcr-Abl的cDNA條帶,24 h後消失.Western blot實驗錶明:轉染24 h後,開始錶達p210特徵性蛋白.與對照組相比,轉染K562細胞總RNA的DC,在24 h後CD80、CD83、CD86、HLA-DR等錶麵標誌均不同程度錶達增高,併可促進T細胞對K562的殺傷活性.該研究從多方麵角度說明應用腫瘤總RNA負載DC來製備DC疫苗的可行性,提示改良的DC疫苗抗腫瘤可能的應用前景.
탐토인적수돌상세포(dendritic cell,DC)체외경K562세포주총RNA전염후,능부유도출p210단백표체,병유도특이성CTL,위DC역묘적림상응용제공이론기출.자건강인농축백세포제제분리유점부특성적단핵세포,경GM-CSF、IL-4배양5 d후,획득미성숙적DC(imDC);체외이지질체DOTAP혹직접전천공전염K562세포총RNA.추제후즉시이급전염24 h후적DC내RNA진행RT-PCR검측,Western blot분석p210단백표체,류식세포의검측,이급유도CTL살상K562세포공능검측등.결과현시,RT-PCR검측표명:DC경K562세포총RNA전염후,세포내출현Bcr-Abl적cDNA조대,24 h후소실.Western blot실험표명:전염24 h후,개시표체p210특정성단백.여대조조상비,전염K562세포총RNA적DC,재24 h후CD80、CD83、CD86、HLA-DR등표면표지균불동정도표체증고,병가촉진T세포대K562적살상활성.해연구종다방면각도설명응용종류총RNA부재DC래제비DC역묘적가행성,제시개량적DC역묘항종류가능적응용전경.
