农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2005年
4期
516-523
,共8页
李长绿%王秀利%李宁%吴常信
李長綠%王秀利%李寧%吳常信
리장록%왕수리%리저%오상신
cDNA芯片%杂交%点样%优化
cDNA芯片%雜交%點樣%優化
cDNA심편%잡교%점양%우화
应用SpotBotTM芯片点样仪对4种不同的芯片点样液(3×SSC、50%DMSO、3×SSC+1.5 mol/L甜菜碱和MSP)和5个不同公司生产的7种芯片片基(UltraGAPSTM、GAPSⅡ、SuperAmine、SuperAmine Barcoded、Baio氨基载玻片、PL-100C多聚-L-赖氨酸片基和POLY-PREPTM片基)进行了比较分析,发现UltraGAPSTM、GAPSⅡ、SuperAmine和SuperAmine Barcoded片基用3×SSC+1.5 mol/L甜菜碱能得到最佳的点样和杂交结果.同时对克隆PCR产物的扩增和纯化方法、用于点样的DNA样品的浓度、点样环境条件(温度、相对湿度等)、点样后芯片的处理方法、探针的标记方法、芯片的杂交及杂交后的处理等进行了比较、分析和优化.应用优化后的条件成功地在每张芯片上点制27 648个点,并杂交、扫描得到高质量的芯片结果.
應用SpotBotTM芯片點樣儀對4種不同的芯片點樣液(3×SSC、50%DMSO、3×SSC+1.5 mol/L甜菜堿和MSP)和5箇不同公司生產的7種芯片片基(UltraGAPSTM、GAPSⅡ、SuperAmine、SuperAmine Barcoded、Baio氨基載玻片、PL-100C多聚-L-賴氨痠片基和POLY-PREPTM片基)進行瞭比較分析,髮現UltraGAPSTM、GAPSⅡ、SuperAmine和SuperAmine Barcoded片基用3×SSC+1.5 mol/L甜菜堿能得到最佳的點樣和雜交結果.同時對剋隆PCR產物的擴增和純化方法、用于點樣的DNA樣品的濃度、點樣環境條件(溫度、相對濕度等)、點樣後芯片的處理方法、探針的標記方法、芯片的雜交及雜交後的處理等進行瞭比較、分析和優化.應用優化後的條件成功地在每張芯片上點製27 648箇點,併雜交、掃描得到高質量的芯片結果.
응용SpotBotTM심편점양의대4충불동적심편점양액(3×SSC、50%DMSO、3×SSC+1.5 mol/L첨채감화MSP)화5개불동공사생산적7충심편편기(UltraGAPSTM、GAPSⅡ、SuperAmine、SuperAmine Barcoded、Baio안기재파편、PL-100C다취-L-뢰안산편기화POLY-PREPTM편기)진행료비교분석,발현UltraGAPSTM、GAPSⅡ、SuperAmine화SuperAmine Barcoded편기용3×SSC+1.5 mol/L첨채감능득도최가적점양화잡교결과.동시대극륭PCR산물적확증화순화방법、용우점양적DNA양품적농도、점양배경조건(온도、상대습도등)、점양후심편적처리방법、탐침적표기방법、심편적잡교급잡교후적처리등진행료비교、분석화우화.응용우화후적조건성공지재매장심편상점제27 648개점,병잡교、소묘득도고질량적심편결과.
