CAJ | 학술논문

人干细胞因子(human stem cell factor,hSCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用.利用改进的PCR体系,从人类基因组DNA中扩增出自hSCF基因编码起始位点(+181)至5＇旁侧-1190位点共1 372 bp的片段,将其克隆至pGEM-T载体中,经序列分析证明无误.为探寻此片段中对转录调控起作用的具体区域,用基因缺失技术从-162(BstX I)位点向上游分别延伸至-273(Pst Ⅰ)、-339(Sma Ⅰ)、-381(Sac Ⅰ)、-440(EcoR Ⅰ)、-570(Hinc Ⅱ)、-853(Bgl Ⅱ)及-1190(Xho Ⅰ)等位点,共获7个不同长度的hSCF基因5＇旁侧序列片段,随后将这7个片段分别克隆入荧光素酶(luc)报告基因栽体pGL2-Promoter.经阳离子脂质体包埋技术介导转染HeLa细胞,培养48 h后检测Luc活性.结果表明:hSCF基因5＇旁侧-1190～-853区域对luc表达有明显的增强作用,而-339～-273区域则显示有抑制作用.分别以包含这两个区域的片段为探针进行竞争性凝胶阻滞实验,结果均出现一个或多个特异性滞留区带,说明这两个区域存在转录因子的结合位点.实验结果表明,hSCF基因5＇旁侧-1190～-853区域富含AT,是一典型基质结合区,而-339～-273区域为一新的沉默子,在hSCF基因表达中发挥调控作用.
인간세포인자(human stem cell factor,hSCF)재다충포유동물간세포적증식、분화화이거중발휘중요작용.이용개진적PCR체계,종인류기인조DNA중확증출자hSCF기인편마기시위점(+181)지5＇방측-1190위점공1 372 bp적편단,장기극륭지pGEM-T재체중,경서렬분석증명무오.위탐심차편단중대전록조공기작용적구체구역,용기인결실기술종-162(BstX I)위점향상유분별연신지-273(Pst Ⅰ)、-339(Sma Ⅰ)、-381(Sac Ⅰ)、-440(EcoR Ⅰ)、-570(Hinc Ⅱ)、-853(Bgl Ⅱ)급-1190(Xho Ⅰ)등위점,공획7개불동장도적hSCF기인5＇방측서렬편단,수후장저7개편단분별극륭입형광소매(luc)보고기인재체pGL2-Promoter.경양리자지질체포매기술개도전염HeLa세포,배양48 h후검측Luc활성.결과표명:hSCF기인5＇방측-1190～-853구역대luc표체유명현적증강작용,이-339～-273구역칙현시유억제작용.분별이포함저량개구역적편단위탐침진행경쟁성응효조체실험,결과균출현일개혹다개특이성체류구대,설명저량개구역존재전록인자적결합위점.실험결과표명,hSCF기인5＇방측-1190～-853구역부함AT,시일전형기질결합구,이-339～-273구역위일신적침묵자,재hSCF기인표체중발휘조공작용.