CAJ | 학술논문

目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响.方法:PCR扩增制备重组HIV-1 gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化;在NC片段5′端设计重叠区域,3′端引入SalⅠ酶切位点.应用Overlapping PCR将CAP2和NC片段拼接并克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANTAB5S上,建立HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点随机化的噬菌体展示文库.结果:该噬菌体展示文库库容量为2.1×106,滴度为3.0×1012TU/ml,CAP2/NC片段插入率为52.1%;12个样品的序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布; 10个阳性单克隆噬菌体CAP2/NC-LD3-pCANTAB5S样品中9个与IgG特异结合.结论:成功地对HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点进行了随机化并展示于噬菌体表面,构建了其噬菌体展示文库,为筛选耐药性突变的PR敏感切割序列及构建蛋白酶抑制剂噬菌体筛选模型打下基础.
목적:구건HIV-1 Gag PR단백P2/NC절할위점서렬수궤화적서균체전시문고,연구HIV-1단백매(protease PR)내약성돌변대기민감절할서렬적영향.방법:PCR확증제비중조HIV-1 gag기인상적CAP2화NC편단,재CAP2편단5′단인입StuⅠ매절위점,3′단PR절할위점처적안기산서렬진행수궤화;재NC편단5′단설계중첩구역,3′단인입SalⅠ매절위점.응용Overlapping PCR장CAP2화NC편단병접병극륭우서균체전시재체LD3-pCANTAB5S상,건립HIV-1PR파단백CAP2화NC지간절할위점수궤화적서균체전시문고.결과:해서균체전시문고고용량위2.1×106,적도위3.0×1012TU/ml,CAP2/NC편단삽입솔위52.1%;12개양품적서렬분석현시절할위점중수궤화적핵감산여안기산균정수궤성분포; 10개양성단극륭서균체CAP2/NC-LD3-pCANTAB5S양품중9개여IgG특이결합.결론:성공지대HIV-1PR파단백CAP2화NC지간절할위점진행료수궤화병전시우서균체표면,구건료기서균체전시문고,위사선내약성돌변적PR민감절할서렬급구건단백매억제제서균체사선모형타하기출.