无锡轻工大学学报
無錫輕工大學學報
무석경공대학학보
JOURNAL OF WUXI UNIVERSITY OF LIGHT INDUSTRY
2002年
3期
218-223
,共6页
邬敏辰%朱吉%黄伟达%孙崇荣
鄔敏辰%硃吉%黃偉達%孫崇榮
오민신%주길%황위체%손숭영
圆弧青霉PG37%碱性脂肪酶%克隆%表达
圓弧青黴PG37%堿性脂肪酶%剋隆%錶達
원호청매PG37%감성지방매%극륭%표체
圆弧青霉PG37总RNA甲醛变性电泳呈现真核生物所特有的28S rRNA和18S rRNA条带.根据PG37所产碱性脂肪酶(Lip PC) N末端氨基酸残基序列和真核生物mRNA在3'端具有poly(A)等所提供的生物信息,采用RT-PCR技术扩增了Lip PC成熟肽和3'非编码区的cDNA片段,并将该PCR产物直接克隆至pUCm-T载体中.序列分析表明,Lip PC含有258个氨基酸残基,其中保守的五肽序列为Gly-His-Ser-Leu-Gly.进一步采用ClonTech公司的SmartTM PCR cDNA文库构建试剂盒,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段,从而完成了Lip PC完整cDNA的分析测定.最后将编码完整脂肪酶蛋白质的cDNA克隆至pGEX-5X-3表达载体中,SDS-PAGE检测结果表明,大肠杆菌BL21所表达的GST-Lip PC融合蛋白质分子质量约为53 ku.
圓弧青黴PG37總RNA甲醛變性電泳呈現真覈生物所特有的28S rRNA和18S rRNA條帶.根據PG37所產堿性脂肪酶(Lip PC) N末耑氨基痠殘基序列和真覈生物mRNA在3'耑具有poly(A)等所提供的生物信息,採用RT-PCR技術擴增瞭Lip PC成熟肽和3'非編碼區的cDNA片段,併將該PCR產物直接剋隆至pUCm-T載體中.序列分析錶明,Lip PC含有258箇氨基痠殘基,其中保守的五肽序列為Gly-His-Ser-Leu-Gly.進一步採用ClonTech公司的SmartTM PCR cDNA文庫構建試劑盒,擴增、剋隆和測定瞭自轉錄起始點至編碼區的cDNA片段,從而完成瞭Lip PC完整cDNA的分析測定.最後將編碼完整脂肪酶蛋白質的cDNA剋隆至pGEX-5X-3錶達載體中,SDS-PAGE檢測結果錶明,大腸桿菌BL21所錶達的GST-Lip PC融閤蛋白質分子質量約為53 ku.
원호청매PG37총RNA갑철변성전영정현진핵생물소특유적28S rRNA화18S rRNA조대.근거PG37소산감성지방매(Lip PC) N말단안기산잔기서렬화진핵생물mRNA재3'단구유poly(A)등소제공적생물신식,채용RT-PCR기술확증료Lip PC성숙태화3'비편마구적cDNA편단,병장해PCR산물직접극륭지pUCm-T재체중.서렬분석표명,Lip PC함유258개안기산잔기,기중보수적오태서렬위Gly-His-Ser-Leu-Gly.진일보채용ClonTech공사적SmartTM PCR cDNA문고구건시제합,확증、극륭화측정료자전록기시점지편마구적cDNA편단,종이완성료Lip PC완정cDNA적분석측정.최후장편마완정지방매단백질적cDNA극륭지pGEX-5X-3표체재체중,SDS-PAGE검측결과표명,대장간균BL21소표체적GST-Lip PC융합단백질분자질량약위53 ku.
