安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2002年
1期
3-5
,共3页
聚合酶链反应%基因文库/血吸虫,日本自由词 磷酸丙糖转移酶
聚閤酶鏈反應%基因文庫/血吸蟲,日本自由詞 燐痠丙糖轉移酶
취합매련반응%기인문고/혈흡충,일본자유사 린산병당전이매
目的用PCR法自日本血吸虫童虫cDNA文库筛选磷酸丙糖转移酶(TPM)基因,为进一步亚克隆和表达奠定基础.方法根据GeneBank中的日本血吸虫TPM基因开放阅读框设计合成一对引物,应用PCR测定cDNA文库中该基因的频率.根据测得的频率,将适量的噬菌体接种于96孔细胞培养板上进行细菌培养扩增.再利用PCR鉴定阳性克隆所在位置,经过选择性扩增,筛选出阳性克隆,并环化成质粒,经测序验证后构建pGEM-T/TPM克隆载体.结果经过3轮筛选,所得阳性克隆经过测序,用Genebank BLAST进行序列比较,证实为日本血吸虫磷酸丙糖转移酶基因.重组质粒pGEM-T经双酶切证实有约760 bp的插入片段.结论从日本血吸虫cDNA 文库中筛选出TPM基因,并成功地构建该基因的克隆载体,为研究该基因在血吸虫糖代谢中的作用创造了条件.
目的用PCR法自日本血吸蟲童蟲cDNA文庫篩選燐痠丙糖轉移酶(TPM)基因,為進一步亞剋隆和錶達奠定基礎.方法根據GeneBank中的日本血吸蟲TPM基因開放閱讀框設計閤成一對引物,應用PCR測定cDNA文庫中該基因的頻率.根據測得的頻率,將適量的噬菌體接種于96孔細胞培養闆上進行細菌培養擴增.再利用PCR鑒定暘性剋隆所在位置,經過選擇性擴增,篩選齣暘性剋隆,併環化成質粒,經測序驗證後構建pGEM-T/TPM剋隆載體.結果經過3輪篩選,所得暘性剋隆經過測序,用Genebank BLAST進行序列比較,證實為日本血吸蟲燐痠丙糖轉移酶基因.重組質粒pGEM-T經雙酶切證實有約760 bp的插入片段.結論從日本血吸蟲cDNA 文庫中篩選齣TPM基因,併成功地構建該基因的剋隆載體,為研究該基因在血吸蟲糖代謝中的作用創造瞭條件.
목적용PCR법자일본혈흡충동충cDNA문고사선린산병당전이매(TPM)기인,위진일보아극륭화표체전정기출.방법근거GeneBank중적일본혈흡충TPM기인개방열독광설계합성일대인물,응용PCR측정cDNA문고중해기인적빈솔.근거측득적빈솔,장괄량적서균체접충우96공세포배양판상진행세균배양확증.재이용PCR감정양성극륭소재위치,경과선택성확증,사선출양성극륭,병배화성질립,경측서험증후구건pGEM-T/TPM극륭재체.결과경과3륜사선,소득양성극륭경과측서,용Genebank BLAST진행서렬비교,증실위일본혈흡충린산병당전이매기인.중조질립pGEM-T경쌍매절증실유약760 bp적삽입편단.결론종일본혈흡충cDNA 문고중사선출TPM기인,병성공지구건해기인적극륭재체,위연구해기인재혈흡충당대사중적작용창조료조건.
