细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2001年
6期
518-520
,共3页
付员根%温博贵%刘志国%吴开春%樊代明%王晓侠
付員根%溫博貴%劉誌國%吳開春%樊代明%王曉俠
부원근%온박귀%류지국%오개춘%번대명%왕효협
腺病毒%纤毛%基因克隆%大肠肝菌%基因表达
腺病毒%纖毛%基因剋隆%大腸肝菌%基因錶達
선병독%섬모%기인극륭%대장간균%기인표체
目的克隆腺病毒纤毛基因,为构建腺病毒靶向性载体创造条件.方法应用限制性内切酶酶切技术,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy-1,经多次亚克隆最后完成克隆纤毛基因,并构建纤毛基因原核表达载体.用IPTG诱导纤毛蛋白的表达,再用SDS-PAGE和Western blot对其进行分析.结果成功地克隆纤毛基因.质粒pBS/Fiber经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性.经质粒pQE/Fiber转化的细菌,在IPTG诱导下可表达一种新的蛋白,并于5h表达量最高.经Western blot证实,在变性条件下表达蛋白的Mr为62 000,在非变性条件下为186 000.结论已克隆的纤毛基因能在大肠杆菌中表达,并具有三聚体结构,可用于腺病毒载体靶向性构建.
目的剋隆腺病毒纖毛基因,為構建腺病毒靶嚮性載體創造條件.方法應用限製性內切酶酶切技術,酶切腺病毒骨架質粒pAdEasy-1,經多次亞剋隆最後完成剋隆纖毛基因,併構建纖毛基因原覈錶達載體.用IPTG誘導纖毛蛋白的錶達,再用SDS-PAGE和Western blot對其進行分析.結果成功地剋隆纖毛基因.質粒pBS/Fiber經限製性內切酶酶切鑒定及測序證實瞭其正確性.經質粒pQE/Fiber轉化的細菌,在IPTG誘導下可錶達一種新的蛋白,併于5h錶達量最高.經Western blot證實,在變性條件下錶達蛋白的Mr為62 000,在非變性條件下為186 000.結論已剋隆的纖毛基因能在大腸桿菌中錶達,併具有三聚體結構,可用于腺病毒載體靶嚮性構建.
목적극륭선병독섬모기인,위구건선병독파향성재체창조조건.방법응용한제성내절매매절기술,매절선병독골가질립pAdEasy-1,경다차아극륭최후완성극륭섬모기인,병구건섬모기인원핵표체재체.용IPTG유도섬모단백적표체,재용SDS-PAGE화Western blot대기진행분석.결과성공지극륭섬모기인.질립pBS/Fiber경한제성내절매매절감정급측서증실료기정학성.경질립pQE/Fiber전화적세균,재IPTG유도하가표체일충신적단백,병우5h표체량최고.경Western blot증실,재변성조건하표체단백적Mr위62 000,재비변성조건하위186 000.결론이극륭적섬모기인능재대장간균중표체,병구유삼취체결구,가용우선병독재체파향성구건.
