天花粉蛋白的定点突变及聚乙二醇修饰
천화분단백적정점돌변급취을이순수식
Site-directed Mutation of Trichosanthin and Chemical Modification of Mutant by Polyethylene Glycol
  • 万方数据
    中国生物制品学杂志 중국생물제품학잡지
    CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
    2008年 3期 194-196,203 ,共4页

    安群星%雷迎峰%穆士杰%张献清%陈蕤%夏爱军%陈晨%易静%吴原茹%徐志凯

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    천화분단백%정점돌변%취을이순%수식
    目的 对天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)进行定点突变及聚乙二醇(PEG)修饰,并对修饰产物进行DNA酶活性分析.方法 选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83和KR173-174)进行定点突变,将所构建的两个突变体(TCSYFF81-83ACS和TCSKR173-174CG)在大肠杆菌中表达,并纯化表达产物.通过第82位和173位引入的半胱氨酸残基,分别对突变体蛋白进行PEG定点修饰.通过与突变型TCS比较,分析两个PEG修饰型TCS的DNA酶活性.结果 突变的TCS经酶切鉴定及测序分析,证明质粒构建正确,表达的目的 蛋白相对分子质量约为30 000,经PEG修饰后,相对分子质量约为40000.初步分析显示,与突变型TCS相比,所构建的两个PEG修饰型TCS也显示出类似DNA酶活性.结论 成功进行了TCS的定点突变及PEG修饰,为基因工程及化学修饰方法改造TCS提供了一条可行的途径.
    목적 대천화분단백(Trichosanthin,TCS)진행정점돌변급취을이순(PEG)수식,병대수식산물진행DNA매활성분석.방법 선택TCS분자상가능적항원결정족위점(YFF81-83화KR173-174)진행정점돌변,장소구건적량개돌변체(TCSYFF81-83ACS화TCSKR173-174CG)재대장간균중표체,병순화표체산물.통과제82위화173위인입적반광안산잔기,분별대돌변체단백진행PEG정점수식.통과여돌변형TCS비교,분석량개PEG수식형TCS적DNA매활성.결과 돌변적TCS경매절감정급측서분석,증명질립구건정학,표체적목적 단백상대분자질량약위30 000,경PEG수식후,상대분자질량약위40000.초보분석현시,여돌변형TCS상비,소구건적량개PEG수식형TCS야현시출유사DNA매활성.결론 성공진행료TCS적정점돌변급PEG수식,위기인공정급화학수식방법개조TCS제공료일조가행적도경.
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