中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2008年
4期
315-319
,共5页
孙元%夏照和%梁冰冰%彭伍平%仇华吉
孫元%夏照和%樑冰冰%彭伍平%仇華吉
손원%하조화%량빙빙%팽오평%구화길
猪瘟病毒%E2蛋白%密码子优化%杆状病毒表达系统%间接ELISA
豬瘟病毒%E2蛋白%密碼子優化%桿狀病毒錶達繫統%間接ELISA
저온병독%E2단백%밀마자우화%간상병독표체계통%간접ELISA
根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍.将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的问接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化.确定的ELISA最佳条件为:抗原包被浓度为2 μg/mL,封闭液为10 g/L聚乙烯醇PBS溶液,被检血清1∶160稀释,辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG(二抗)1∶5 000稀释.确定的阴性血清临界D450 nm值为0.30,阳性血清临界D450 nm值为0.35.将该ELISA方法与IDEXX公司生产的猪瘟病毒抗体检测试剂盒做相关比较,结果符合率为82.3%.表明,该方法可以用于猪瘟病毒抗体的检测.
根據昆蟲細胞密碼子偏嗜性,對豬瘟病毒E2基因進行密碼子優化,併利用昆蟲桿狀病毒錶達繫統進行瞭錶達,錶達水平約為野生型E2基因的3倍.將錶達的重組E2蛋白純化後作為ELISA包被抗原,建立瞭一種基于重組E2蛋白的問接ELISA方法,併對此方法的反應條件進行瞭優化.確定的ELISA最佳條件為:抗原包被濃度為2 μg/mL,封閉液為10 g/L聚乙烯醇PBS溶液,被檢血清1∶160稀釋,辣根過氧化物酶標記的兔抗豬IgG(二抗)1∶5 000稀釋.確定的陰性血清臨界D450 nm值為0.30,暘性血清臨界D450 nm值為0.35.將該ELISA方法與IDEXX公司生產的豬瘟病毒抗體檢測試劑盒做相關比較,結果符閤率為82.3%.錶明,該方法可以用于豬瘟病毒抗體的檢測.
근거곤충세포밀마자편기성,대저온병독E2기인진행밀마자우화,병이용곤충간상병독표체계통진행료표체,표체수평약위야생형E2기인적3배.장표체적중조E2단백순화후작위ELISA포피항원,건립료일충기우중조E2단백적문접ELISA방법,병대차방법적반응조건진행료우화.학정적ELISA최가조건위:항원포피농도위2 μg/mL,봉폐액위10 g/L취을희순PBS용액,피검혈청1∶160희석,랄근과양화물매표기적토항저IgG(이항)1∶5 000희석.학정적음성혈청림계D450 nm치위0.30,양성혈청림계D450 nm치위0.35.장해ELISA방법여IDEXX공사생산적저온병독항체검측시제합주상관비교,결과부합솔위82.3%.표명,해방법가이용우저온병독항체적검측.
