CAJ | 학술논문

背景:维持正常的肝再生足避免肝纤维化和肝癌发生发展的关键环节,中医药调控肝再生主要反映在单味或复方中药对肝细胞、间质细胞、骨髓干细胞的增殖调控.目的:利用基因芯片技术探讨中药左归丸对同种异性骨髓移植小鼠肝再生相关基因信号通路的影响.设计、时间及地点:开放件实验,于2002-01/2007-12在湖北中医学院附属医院肝病研究所完成.材料:SPF级4周龄BABL/C小鼠,雄性10只,作为供体;雌性80只,作为受体,随机分为单纯骨髓移植组、左归丸治疗组,40只/组.小鼠16K v1.0基因表达谱寡核苷酸芯片由上海生物芯片公司提供.芹归丸由熟地、淮山药、枸杞子、山茱萸、菟丝了、川牛膝、鹿角胶、龟板胶组成.方法:两组受体小鼠接受60Co源γ射线照射后,经尾静脉输入供鼠单个核细胞悬液0.2 mL(约2×106个细胞),移植后分别给予生理盐水、左归丸7g/(kg·d)灌胃,6个月后取肝组织标本.选用小鼠基因表达谱寡核苷酸芯片,提取液氮冻存肝组织总RNA,利用反转录酶合成掺有荧光标记的cDNA探针,将探针与基因表达谱芯片杂交,筛选样奉之间杂交信号比值有差异表达的基因.利用GenBank ID和UniGene数据库将差异表达基因聚类,按基因本体分类法对聚类的差异表达基因分类,并采用KEGG数据库查询差异表达基因所涉及的信号通路.主要观察指标:差异表达基因谱.与肝再生相关的代谢及信号通路.结果:①与单纯骨髓移植组相比,左归丸治疗组差异表达基因共1 147条,已知功能基因有533条,其中209条基因涉及70种生物化学通路.②在差异表达基因涉及的代谢信号通路中,与肝再生相关的信号通路主要有Wnt信号通路、MAPK信号通路、TGF β信号通路、Jak-STAT信号通路、凋亡、Toll样受体信号通路等,这些通路中Wnt1、EGF、FGF2、FGF16、MAPKK1、E2F、CSF3、Myd88、sFRP1、sFRP5、CSF2受体、CNTF受体、Caspase 12等基因表达上调,MAPK9、Rac1、GSK3、Wnt10a、IL12a、蛋白激酶C γ、Akt2、Activin A受体等基因表达下调.结论:左归丸调控肝再生的作用机制可能在于网络式双向调控肝再生相关信号通路中的基因表达. 揹景:維持正常的肝再生足避免肝纖維化和肝癌髮生髮展的關鍵環節,中醫藥調控肝再生主要反映在單味或複方中藥對肝細胞、間質細胞、骨髓榦細胞的增殖調控.目的:利用基因芯片技術探討中藥左歸汍對同種異性骨髓移植小鼠肝再生相關基因信號通路的影響.設計、時間及地點:開放件實驗,于2002-01/2007-12在湖北中醫學院附屬醫院肝病研究所完成.材料:SPF級4週齡BABL/C小鼠,雄性10隻,作為供體;雌性80隻,作為受體,隨機分為單純骨髓移植組、左歸汍治療組,40隻/組.小鼠16K v1.0基因錶達譜寡覈苷痠芯片由上海生物芯片公司提供.芹歸汍由熟地、淮山藥、枸杞子、山茱萸、菟絲瞭、川牛膝、鹿角膠、龜闆膠組成.方法:兩組受體小鼠接受60Co源γ射線照射後,經尾靜脈輸入供鼠單箇覈細胞懸液0.2 mL(約2×106箇細胞),移植後分彆給予生理鹽水、左歸汍7g/(kg·d)灌胃,6箇月後取肝組織標本.選用小鼠基因錶達譜寡覈苷痠芯片,提取液氮凍存肝組織總RNA,利用反轉錄酶閤成摻有熒光標記的cDNA探針,將探針與基因錶達譜芯片雜交,篩選樣奉之間雜交信號比值有差異錶達的基因.利用GenBank ID和UniGene數據庫將差異錶達基因聚類,按基因本體分類法對聚類的差異錶達基因分類,併採用KEGG數據庫查詢差異錶達基因所涉及的信號通路.主要觀察指標:差異錶達基因譜.與肝再生相關的代謝及信號通路.結果:①與單純骨髓移植組相比,左歸汍治療組差異錶達基因共1 147條,已知功能基因有533條,其中209條基因涉及70種生物化學通路.②在差異錶達基因涉及的代謝信號通路中,與肝再生相關的信號通路主要有Wnt信號通路、MAPK信號通路、TGF β信號通路、Jak-STAT信號通路、凋亡、Toll樣受體信號通路等,這些通路中Wnt1、EGF、FGF2、FGF16、MAPKK1、E2F、CSF3、Myd88、sFRP1、sFRP5、CSF2受體、CNTF受體、Caspase 12等基因錶達上調,MAPK9、Rac1、GSK3、Wnt10a、IL12a、蛋白激酶C γ、Akt2、Activin A受體等基因錶達下調.結論:左歸汍調控肝再生的作用機製可能在于網絡式雙嚮調控肝再生相關信號通路中的基因錶達.
배경:유지정상적간재생족피면간섬유화화간암발생발전적관건배절,중의약조공간재생주요반영재단미혹복방중약대간세포、간질세포、골수간세포적증식조공.목적:이용기인심편기술탐토중약좌귀환대동충이성골수이식소서간재생상관기인신호통로적영향.설계、시간급지점:개방건실험,우2002-01/2007-12재호북중의학원부속의원간병연구소완성.재료:SPF급4주령BABL/C소서,웅성10지,작위공체;자성80지,작위수체,수궤분위단순골수이식조、좌귀환치료조,40지/조.소서16K v1.0기인표체보과핵감산심편유상해생물심편공사제공.근귀환유숙지、회산약、구기자、산수유、토사료、천우슬、록각효、구판효조성.방법:량조수체소서접수60Co원γ사선조사후,경미정맥수입공서단개핵세포현액0.2 mL(약2×106개세포),이식후분별급여생리염수、좌귀환7g/(kg·d)관위,6개월후취간조직표본.선용소서기인표체보과핵감산심편,제취액담동존간조직총RNA,이용반전록매합성참유형광표기적cDNA탐침,장탐침여기인표체보심편잡교,사선양봉지간잡교신호비치유차이표체적기인.이용GenBank ID화UniGene수거고장차이표체기인취류,안기인본체분류법대취류적차이표체기인분류,병채용KEGG수거고사순차이표체기인소섭급적신호통로.주요관찰지표:차이표체기인보.여간재생상관적대사급신호통로.결과:①여단순골수이식조상비,좌귀환치료조차이표체기인공1 147조,이지공능기인유533조,기중209조기인섭급70충생물화학통로.②재차이표체기인섭급적대사신호통로중,여간재생상관적신호통로주요유Wnt신호통로、MAPK신호통로、TGF β신호통로、Jak-STAT신호통로、조망、Toll양수체신호통로등,저사통로중Wnt1、EGF、FGF2、FGF16、MAPKK1、E2F、CSF3、Myd88、sFRP1、sFRP5、CSF2수체、CNTF수체、Caspase 12등기인표체상조,MAPK9、Rac1、GSK3、Wnt10a、IL12a、단백격매C γ、Akt2、Activin A수체등기인표체하조.결론:좌귀환조공간재생적작용궤제가능재우망락식쌍향조공간재생상관신호통로중적기인표체.