CAJ | 학술논문

目的:研制抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性单抗,鉴定该单抗识别的抗原分子.方法:以人肝窦内皮细胞(human liver sinusoidal endothelial cell, HLSEC)免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用甲基纤维素选择培养液培养,制备抗HLSEC的单克隆抗体库.采用免疫荧光染色、黏附实验等方法筛选、鉴定能抑制结肠癌Ls174T细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性单克隆抗体.提取肝窦内皮细胞膜蛋白,采用Western blotting方法鉴定单抗识别的功能性抗原蛋白.结果:HLSEC免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合后产生1 440个杂交瘤株,获得119株产生抗HLSEC抗体的阳性克隆,其中20株能显著抑制具有肝转移能力的结肠癌Ls174T细胞与HLSEC的黏附;其中15株为IgM型,3株为IgG型,2株测不到重链;其中1株抗黏附能力最强的单抗(黏附抑制率为51%)命名为12B6,该单抗在5～200 μg/ml范围内显著阻断HLSEC与Ls174T的黏附,且呈剂量依赖性;单抗12B6所识别的HLSEC抗原蛋白的相对分子质量为46 000.结论:建立了抗HLSEC单克隆抗体库,获得了20株具有抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性抗体,初步鉴定了一种可能参与结肠癌肝转移的黏附分子,为结肠癌的组织器官特异转移机制及靶向治疗的研究奠定了一定的基础.
목적:연제억제결장암세포여간두혈관내피세포점부적공능성단항,감정해단항식별적항원분자.방법:이인간두내피세포(human liver sinusoidal endothelial cell, HLSEC)면역BALB/c소서,장소서비세포여SP2/0세포융합,채용갑기섬유소선택배양액배양,제비항HLSEC적단극륭항체고.채용면역형광염색、점부실험등방법사선、감정능억제결장암Ls174T세포여간두내피세포점부적공능성단극륭항체.제취간두내피세포막단백,채용Western blotting방법감정단항식별적공능성항원단백.결과:HLSEC면역소서적비세포여SP2/0세포융합후산생1 440개잡교류주,획득119주산생항HLSEC항체적양성극륭,기중20주능현저억제구유간전이능력적결장암Ls174T세포여HLSEC적점부;기중15주위IgM형,3주위IgG형,2주측불도중련;기중1주항점부능력최강적단항(점부억제솔위51%)명명위12B6,해단항재5～200 μg/ml범위내현저조단HLSEC여Ls174T적점부,차정제량의뢰성;단항12B6소식별적HLSEC항원단백적상대분자질량위46 000.결론:건립료항HLSEC단극륭항체고,획득료20주구유억제결장암세포여간두혈관내피세포점부적공능성항체,초보감정료일충가능삼여결장암간전이적점부분자,위결장암적조직기관특이전이궤제급파향치료적연구전정료일정적기출.