CAJ | 학술논문

本研究建立真核细胞表达的Gfi1基因重组慢病毒载体包装系统,并实现Gfi1在32D细胞中长期、稳定的表达,为进一步研究Gfi1基因在恶性血液病中的发生发展建立一个有效的平台.制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统:转移质粒(pLOX-Gfi1/pLOX)、包装质粒(pCMV△AR8.2)及包膜蛋白质粒(pMD.G).用脂质体法将三质粒共转染包装细胞293T,48小时后收集病毒上清,并转染靶细胞32D;用Western-blot法检测293T及32D细胞中Gfi1的整合及表达.结果表明:慢病毒的3种质粒可以高效转染293T细胞,并成功包装出慢病毒.目的基因Gfi1能被重组慢病毒高效导入靶细胞32D,并稳定表达,在荧光显微镜下可直接观察到GFP.Western-blot能检测到Gfi1蛋白在包装细胞293T及32D细胞中的表达.结论:慢病毒介导的Gfi1基因可以高效稳定转染32D细胞并持续表达,证明本研究建立了一种有效的基因转移系统.
본연구건립진핵세포표체적Gfi1기인중조만병독재체포장계통,병실현Gfi1재32D세포중장기、은정적표체,위진일보연구Gfi1기인재악성혈액병중적발생발전건립일개유효적평태.제비완정적중조만병독재체삼질립계통:전이질립(pLOX-Gfi1/pLOX)、포장질립(pCMV△AR8.2)급포막단백질립(pMD.G).용지질체법장삼질립공전염포장세포293T,48소시후수집병독상청,병전염파세포32D;용Western-blot법검측293T급32D세포중Gfi1적정합급표체.결과표명:만병독적3충질립가이고효전염293T세포,병성공포장출만병독.목적기인Gfi1능피중조만병독고효도입파세포32D,병은정표체,재형광현미경하가직접관찰도GFP.Western-blot능검측도Gfi1단백재포장세포293T급32D세포중적표체.결론:만병독개도적Gfi1기인가이고효은정전염32D세포병지속표체,증명본연구건립료일충유효적기인전이계통.