CAJ | 학술논문

旨在研究血清学检测的雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体的特异性.以从噬菌体Fab抗体库中筛选到具有较高雄性特异性结合活性的重组噬菌体克隆为基础,构建Fab抗体的可溶性表达噬质粒,并诱导和纯化该抗体片段,利用免疫荧光FITC/DAPI共染技术和ELISA分析其特异性.结果表明,该抗体在约49 ku处有条带出现.在Fab抗体和H-Y抗血清的细胞免疫荧光比较分析试验中发现,从雌、雄鼠脾细胞的阳性细胞数量和平均荧光强度的角度分析,Fab抗体的雄性特异性强于抗血清.石蜡切片免疫荧光定量分析显示,Fab抗体与雄鼠肝脏的结合活性明显高于对应雌鼠,差异极显著(t=20.73,P=0.002 3＜0.01),而H-Y抗血清与雄鼠肝脏的结合活性略高于对应雌鼠,差异显著(t=7.11,P=0.019 2＜0.05).以C57BL/6雄鼠脾细胞、睾丸细胞作为抗原的ELISA分析显示,Fab抗体具有雄性特异性,但Fab抗体的OD值低于抗血清.结果提示,Fab抗体的雄性特异性高于H-Y抗血清,但其雄性特异性结合活性低于H-Y抗血清,Fab抗体在具备雄性特异性的同时,仍有少量雌性非特异性结合,Fab抗体的体外亲和力成熟可作为后续研究工作,以获得高亲和力、高雄性特异性的可溶性Fab抗体分子.
지재연구혈청학검측적웅성특이성항원서균체Fab항체적특이성.이종서균체Fab항체고중사선도구유교고웅성특이성결합활성적중조서균체극륭위기출,구건Fab항체적가용성표체서질립,병유도화순화해항체편단,이용면역형광FITC/DAPI공염기술화ELISA분석기특이성.결과표명,해항체재약49 ku처유조대출현.재Fab항체화H-Y항혈청적세포면역형광비교분석시험중발현,종자、웅서비세포적양성세포수량화평균형광강도적각도분석,Fab항체적웅성특이성강우항혈청.석사절편면역형광정량분석현시,Fab항체여웅서간장적결합활성명현고우대응자서,차이겁현저(t=20.73,P=0.002 3＜0.01),이H-Y항혈청여웅서간장적결합활성략고우대응자서,차이현저(t=7.11,P=0.019 2＜0.05).이C57BL/6웅서비세포、고환세포작위항원적ELISA분석현시,Fab항체구유웅성특이성,단Fab항체적OD치저우항혈청.결과제시,Fab항체적웅성특이성고우H-Y항혈청,단기웅성특이성결합활성저우H-Y항혈청,Fab항체재구비웅성특이성적동시,잉유소량자성비특이성결합,Fab항체적체외친화력성숙가작위후속연구공작,이획득고친화력、고웅성특이성적가용성Fab항체분자.