潍坊医学院学报
濰坊醫學院學報
유방의학원학보
JOURNAL OF WEIFANG MEDICAL COLLEGE
2012年
3期
186-188,后插3
,共4页
孙霞%付显俊%李江%高玉光
孫霞%付顯俊%李江%高玉光
손하%부현준%리강%고옥광
转录因子Ets-1%基质金属蛋白酶-20%RT-PCR%实时定量RT-PCR%转染
轉錄因子Ets-1%基質金屬蛋白酶-20%RT-PCR%實時定量RT-PCR%轉染
전록인자Ets-1%기질금속단백매-20%RT-PCR%실시정량RT-PCR%전염
目的 构建转录因子Ets-1的pcDNA3.1/myc-HisA真核表达载体,转染小鼠成釉细胞,检测Ets-1调控小鼠成釉细胞MMP-20的表达,为研究Ets-1在牙釉质发育过程中的重要作用奠定基础.方法 以从小鼠成釉细胞中提取的总RNA逆转录所得cDNA为模板,用RT-PCR法扩增得出含有kpn Ⅰ和BamH Ⅰ的Els-1目的 基因连接到pcDNA3.1/myc-HisA真核表达载体上.将重组质粒瞬时转染到小鼠成釉细胞中观察,并通过实时定量RT-PCR的方法检测MMP-20 mRNA的相对表达量.结果 ①经过PCR引物扩增得到一约1399bp的基因片段,重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-1双酶切进行初步鉴定后,与GenBank登录基因对比显示生物公司测序结果完全正确.②重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-1转染小鼠成釉细胞后(以转染空载体pcDNA3.1/myc-HisA作为对照),实时定量RT-PCR检测MMP-20 mRNA的相对表达量上升明显.结论 成功构建了Ets-1的真核表达载体,初步研究证明小鼠成釉细胞核中Ets-1可以上调MMP-20基因表达水平.
目的 構建轉錄因子Ets-1的pcDNA3.1/myc-HisA真覈錶達載體,轉染小鼠成釉細胞,檢測Ets-1調控小鼠成釉細胞MMP-20的錶達,為研究Ets-1在牙釉質髮育過程中的重要作用奠定基礎.方法 以從小鼠成釉細胞中提取的總RNA逆轉錄所得cDNA為模闆,用RT-PCR法擴增得齣含有kpn Ⅰ和BamH Ⅰ的Els-1目的 基因連接到pcDNA3.1/myc-HisA真覈錶達載體上.將重組質粒瞬時轉染到小鼠成釉細胞中觀察,併通過實時定量RT-PCR的方法檢測MMP-20 mRNA的相對錶達量.結果 ①經過PCR引物擴增得到一約1399bp的基因片段,重組質粒pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-1雙酶切進行初步鑒定後,與GenBank登錄基因對比顯示生物公司測序結果完全正確.②重組質粒pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-1轉染小鼠成釉細胞後(以轉染空載體pcDNA3.1/myc-HisA作為對照),實時定量RT-PCR檢測MMP-20 mRNA的相對錶達量上升明顯.結論 成功構建瞭Ets-1的真覈錶達載體,初步研究證明小鼠成釉細胞覈中Ets-1可以上調MMP-20基因錶達水平.
목적 구건전록인자Ets-1적pcDNA3.1/myc-HisA진핵표체재체,전염소서성유세포,검측Ets-1조공소서성유세포MMP-20적표체,위연구Ets-1재아유질발육과정중적중요작용전정기출.방법 이종소서성유세포중제취적총RNA역전록소득cDNA위모판,용RT-PCR법확증득출함유kpn Ⅰ화BamH Ⅰ적Els-1목적 기인련접도pcDNA3.1/myc-HisA진핵표체재체상.장중조질립순시전염도소서성유세포중관찰,병통과실시정량RT-PCR적방법검측MMP-20 mRNA적상대표체량.결과 ①경과PCR인물확증득도일약1399bp적기인편단,중조질립pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-1쌍매절진행초보감정후,여GenBank등록기인대비현시생물공사측서결과완전정학.②중조질립pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-1전염소서성유세포후(이전염공재체pcDNA3.1/myc-HisA작위대조),실시정량RT-PCR검측MMP-20 mRNA적상대표체량상승명현.결론 성공구건료Ets-1적진핵표체재체,초보연구증명소서성유세포핵중Ets-1가이상조MMP-20기인표체수평.
