微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2005年
5期
675-679
,共5页
赵清%刘相梅%詹杨%林建群%颜望明%边疆%刘缨
趙清%劉相梅%詹楊%林建群%顏望明%邊疆%劉纓
조청%류상매%첨양%림건군%안망명%변강%류영
抗砷基因%喜温硫杆菌%接合转移%极端嗜酸性自养细菌
抗砷基因%喜溫硫桿菌%接閤轉移%極耑嗜痠性自養細菌
항신기인%희온류간균%접합전이%겁단기산성자양세균
利用DNA体外重组技术,将大肠杆菌质粒载体pUM3上的抗砷基因簇片段亚克隆到含有强启动子(tac启动子)并具有广泛寄主范围特性的IncQ族质粒pMMB24上,删除调节基因片段,构建了含有强启动子、可在tra基因诱动下转移的组成型表达的抗砷质粒pSDRA4.通过接合转移的方式将其导入专性自养极端嗜酸性喜温硫杆菌Acidithiobacillus caldus中,构建了冶金工程菌Acidithiobacillus caldus(pSDRA4),接合转移频率为(1.444±0.797)×10-4.表明在大肠杆菌和喜温硫杆菌之间成功地建立了一个遗传转移系统.经检测,重组质粒在喜温硫杆菌中具有较好的稳定性,在无选择压力条件下传代50次基本保持稳定(重组质粒保留76% 以上).经抗砷性能检测,与野生菌相比,构建的喜温硫杆菌工程菌抗砷能力明显提高,从10mmol/L提高到45mmol/L.
利用DNA體外重組技術,將大腸桿菌質粒載體pUM3上的抗砷基因簇片段亞剋隆到含有彊啟動子(tac啟動子)併具有廣汎寄主範圍特性的IncQ族質粒pMMB24上,刪除調節基因片段,構建瞭含有彊啟動子、可在tra基因誘動下轉移的組成型錶達的抗砷質粒pSDRA4.通過接閤轉移的方式將其導入專性自養極耑嗜痠性喜溫硫桿菌Acidithiobacillus caldus中,構建瞭冶金工程菌Acidithiobacillus caldus(pSDRA4),接閤轉移頻率為(1.444±0.797)×10-4.錶明在大腸桿菌和喜溫硫桿菌之間成功地建立瞭一箇遺傳轉移繫統.經檢測,重組質粒在喜溫硫桿菌中具有較好的穩定性,在無選擇壓力條件下傳代50次基本保持穩定(重組質粒保留76% 以上).經抗砷性能檢測,與野生菌相比,構建的喜溫硫桿菌工程菌抗砷能力明顯提高,從10mmol/L提高到45mmol/L.
이용DNA체외중조기술,장대장간균질립재체pUM3상적항신기인족편단아극륭도함유강계동자(tac계동자)병구유엄범기주범위특성적IncQ족질립pMMB24상,산제조절기인편단,구건료함유강계동자、가재tra기인유동하전이적조성형표체적항신질립pSDRA4.통과접합전이적방식장기도입전성자양겁단기산성희온류간균Acidithiobacillus caldus중,구건료야금공정균Acidithiobacillus caldus(pSDRA4),접합전이빈솔위(1.444±0.797)×10-4.표명재대장간균화희온류간균지간성공지건립료일개유전전이계통.경검측,중조질립재희온류간균중구유교호적은정성,재무선택압력조건하전대50차기본보지은정(중조질립보류76% 이상).경항신성능검측,여야생균상비,구건적희온류간균공정균항신능력명현제고,종10mmol/L제고도45mmol/L.
