中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2006年
7期
559-564
,共6页
PKCε%PKCη%HCC1806%抗凋亡
PKCε%PKCη%HCC1806%抗凋亡
PKCε%PKCη%HCC1806%항조망
为探讨PKCε、PKCη对乳腺癌细胞中TNFα诱导凋亡的影响,采用PCR技术,从人肌肉cDNA文库中克隆了全长PKCε和PKCη序列,亚克隆至pcDNA3,转化HCC1806细胞,并选择出稳定的转化细胞株.然后用流式细胞仪检测了PKCε、PKCη过表达对DNA断裂的影响,用Western印迹方法检测了PKCε、PKCη过表达对PARp、caspase 3和caspase 8水解的影响,以及对Bcl-2,Bax表达的影响,和对MAPK磷酸化的影响.流式细胞仪分析DNA含量的结果表明:TNFα处理后,HCC1806/PC、HCC1806/ε、HCC1806/η的sub-G1状态的DNA含量分别为:57.7%、23.3%、14.6%.Western印迹结果表明,当用0.01nmol/L TNFα处理,HCC1806/η中PARP、caspase3、caspase8的水解程度最低,HCC1806/ε中次之,HCC1806/PC最严重;与HCC1806/PC比较,无论用不用TNFα处理,HCC1806/ε都表达更高的Bcl-2,而HCC1806/η不影响Bcl-2的表达.过表达PKCη而不是PKCε抑制了由TNFα引起的p38和JNK的磷酸化,并且是JNK的抑制剂SP600125而不是p38的抑制剂SB220025抑制了PARP的裂解.以上结果显示,过表达PKCε、PKCη可能通过不同的信号途径在HCC1806中起抗凋亡作用,PKCε上调了bcl-2的表达,而PKCη抑制了JNK的磷酸化.
為探討PKCε、PKCη對乳腺癌細胞中TNFα誘導凋亡的影響,採用PCR技術,從人肌肉cDNA文庫中剋隆瞭全長PKCε和PKCη序列,亞剋隆至pcDNA3,轉化HCC1806細胞,併選擇齣穩定的轉化細胞株.然後用流式細胞儀檢測瞭PKCε、PKCη過錶達對DNA斷裂的影響,用Western印跡方法檢測瞭PKCε、PKCη過錶達對PARp、caspase 3和caspase 8水解的影響,以及對Bcl-2,Bax錶達的影響,和對MAPK燐痠化的影響.流式細胞儀分析DNA含量的結果錶明:TNFα處理後,HCC1806/PC、HCC1806/ε、HCC1806/η的sub-G1狀態的DNA含量分彆為:57.7%、23.3%、14.6%.Western印跡結果錶明,噹用0.01nmol/L TNFα處理,HCC1806/η中PARP、caspase3、caspase8的水解程度最低,HCC1806/ε中次之,HCC1806/PC最嚴重;與HCC1806/PC比較,無論用不用TNFα處理,HCC1806/ε都錶達更高的Bcl-2,而HCC1806/η不影響Bcl-2的錶達.過錶達PKCη而不是PKCε抑製瞭由TNFα引起的p38和JNK的燐痠化,併且是JNK的抑製劑SP600125而不是p38的抑製劑SB220025抑製瞭PARP的裂解.以上結果顯示,過錶達PKCε、PKCη可能通過不同的信號途徑在HCC1806中起抗凋亡作用,PKCε上調瞭bcl-2的錶達,而PKCη抑製瞭JNK的燐痠化.
위탐토PKCε、PKCη대유선암세포중TNFα유도조망적영향,채용PCR기술,종인기육cDNA문고중극륭료전장PKCε화PKCη서렬,아극륭지pcDNA3,전화HCC1806세포,병선택출은정적전화세포주.연후용류식세포의검측료PKCε、PKCη과표체대DNA단렬적영향,용Western인적방법검측료PKCε、PKCη과표체대PARp、caspase 3화caspase 8수해적영향,이급대Bcl-2,Bax표체적영향,화대MAPK린산화적영향.류식세포의분석DNA함량적결과표명:TNFα처리후,HCC1806/PC、HCC1806/ε、HCC1806/η적sub-G1상태적DNA함량분별위:57.7%、23.3%、14.6%.Western인적결과표명,당용0.01nmol/L TNFα처리,HCC1806/η중PARP、caspase3、caspase8적수해정도최저,HCC1806/ε중차지,HCC1806/PC최엄중;여HCC1806/PC비교,무론용불용TNFα처리,HCC1806/ε도표체경고적Bcl-2,이HCC1806/η불영향Bcl-2적표체.과표체PKCη이불시PKCε억제료유TNFα인기적p38화JNK적린산화,병차시JNK적억제제SP600125이불시p38적억제제SB220025억제료PARP적렬해.이상결과현시,과표체PKCε、PKCη가능통과불동적신호도경재HCC1806중기항조망작용,PKCε상조료bcl-2적표체,이PKCη억제료JNK적린산화.
