解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2007年
9期
943-945,960
,共4页
李晖%崔玉%周勇%彭剑淳%孙红琰%詹林盛%王全立
李暉%崔玉%週勇%彭劍淳%孫紅琰%詹林盛%王全立
리휘%최옥%주용%팽검순%손홍염%첨림성%왕전립
NK细胞免疫球蛋白样受体%原核表达%蛋白纯化
NK細胞免疫毬蛋白樣受體%原覈錶達%蛋白純化
NK세포면역구단백양수체%원핵표체%단백순화
目的 表达并纯化NK细胞免疫球蛋白样受体KIR3DL1胞外区.方法 以pUC57-KIR3DL1为模板,PCR扩增KIR3DL1胞外区序列,与pGEM-T载体进行A-T克隆;测序正确后,采用定向克隆的方法将KIR3DL11胞外区基因连接到pET28a-DsbA载体上,成功构建了pET28a-DsbA/KIR3DL1重组质粒.将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导DsbA-KIR3DL1融合蛋白表达,溶解于8mol/L尿素中的包涵体经Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化,成功进行复性,再经Superdex 75凝胶层析柱进一步纯化,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的 蛋白的表达及纯化.结果 表达产物呈部分可溶性表达,包涵体纯化后证实获得纯度95%以上的DsbA-KIR3DS1融合蛋白.结论 KIR3DL1胞外区的成功表达及纯化为进一步研究KIR3DL1与相应配体之间的相互作用奠定了基础.
目的 錶達併純化NK細胞免疫毬蛋白樣受體KIR3DL1胞外區.方法 以pUC57-KIR3DL1為模闆,PCR擴增KIR3DL1胞外區序列,與pGEM-T載體進行A-T剋隆;測序正確後,採用定嚮剋隆的方法將KIR3DL11胞外區基因連接到pET28a-DsbA載體上,成功構建瞭pET28a-DsbA/KIR3DL1重組質粒.將重組質粒導入大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導DsbA-KIR3DL1融閤蛋白錶達,溶解于8mol/L尿素中的包涵體經Ni-NTA瓊脂糖親和層析純化,成功進行複性,再經Superdex 75凝膠層析柱進一步純化,SDS-PAGE和Western blot鑒定目的 蛋白的錶達及純化.結果 錶達產物呈部分可溶性錶達,包涵體純化後證實穫得純度95%以上的DsbA-KIR3DS1融閤蛋白.結論 KIR3DL1胞外區的成功錶達及純化為進一步研究KIR3DL1與相應配體之間的相互作用奠定瞭基礎.
목적 표체병순화NK세포면역구단백양수체KIR3DL1포외구.방법 이pUC57-KIR3DL1위모판,PCR확증KIR3DL1포외구서렬,여pGEM-T재체진행A-T극륭;측서정학후,채용정향극륭적방법장KIR3DL11포외구기인련접도pET28a-DsbA재체상,성공구건료pET28a-DsbA/KIR3DL1중조질립.장중조질립도입대장간균BL21(DE3),IPTG유도DsbA-KIR3DL1융합단백표체,용해우8mol/L뇨소중적포함체경Ni-NTA경지당친화층석순화,성공진행복성,재경Superdex 75응효층석주진일보순화,SDS-PAGE화Western blot감정목적 단백적표체급순화.결과 표체산물정부분가용성표체,포함체순화후증실획득순도95%이상적DsbA-KIR3DS1융합단백.결론 KIR3DL1포외구적성공표체급순화위진일보연구KIR3DL1여상응배체지간적상호작용전정료기출.
