中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2008年
10期
872-875
,共4页
侯小强%冯娜%夏咸柱%高玉伟%孙培录%杨松涛
侯小彊%馮娜%夏鹹柱%高玉偉%孫培錄%楊鬆濤
후소강%풍나%하함주%고옥위%손배록%양송도
高迁移率族蛋白B1 B box%原核表达%活性鉴定
高遷移率族蛋白B1 B box%原覈錶達%活性鑒定
고천이솔족단백B1 B box%원핵표체%활성감정
目的:克隆小鼠HMGB1 B box基因,表达具有明显致炎活性的鼠HMGB1 B box蛋白,为深入研究其生物学功能以及新型抗炎制剂的研发奠定基础,也为进一步探讨其与H5N1禽流感病毒性肺炎的相关性奠定了基础.方法:从小鼠的肺脏组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增小鼠HMGB1中的B box的cDNA,构建于载体pMD-18T并进行序列测定,随后构建于原核表达载体pET-28a(+)中.IPTG诱导4小时后可见Mr约13 000的蛋白.经Ni2+ 亲和层析柱纯化获得高纯度的HMGB1 B box 蛋白,然后用此蛋白刺激小鼠外周血单核细胞(PBMCs),作用6小时后用ELISA检测PBMCs释放TNF-α、IL-6的含量.结果:经RT-PCR扩增得到了240 bp的DNA片段,经序列分析与Genebank 中报道的已知序列完全一致;成功构建了含有HMGB1 B box编码序列的原核表达载体;纯化表达的HMGB1 B box蛋白能显著地刺激小鼠PBMCs释放致炎因子TNF-α、IL- 6,具有较好的生物活性.结论:原核表达的小鼠HMGB1 B box蛋白具有较好的生物活性,为进一步研究HMGB1 B box的作用机制以及新型抗炎制剂的研究奠定了基础.
目的:剋隆小鼠HMGB1 B box基因,錶達具有明顯緻炎活性的鼠HMGB1 B box蛋白,為深入研究其生物學功能以及新型抗炎製劑的研髮奠定基礎,也為進一步探討其與H5N1禽流感病毒性肺炎的相關性奠定瞭基礎.方法:從小鼠的肺髒組織中提取總RNA,經RT-PCR擴增小鼠HMGB1中的B box的cDNA,構建于載體pMD-18T併進行序列測定,隨後構建于原覈錶達載體pET-28a(+)中.IPTG誘導4小時後可見Mr約13 000的蛋白.經Ni2+ 親和層析柱純化穫得高純度的HMGB1 B box 蛋白,然後用此蛋白刺激小鼠外週血單覈細胞(PBMCs),作用6小時後用ELISA檢測PBMCs釋放TNF-α、IL-6的含量.結果:經RT-PCR擴增得到瞭240 bp的DNA片段,經序列分析與Genebank 中報道的已知序列完全一緻;成功構建瞭含有HMGB1 B box編碼序列的原覈錶達載體;純化錶達的HMGB1 B box蛋白能顯著地刺激小鼠PBMCs釋放緻炎因子TNF-α、IL- 6,具有較好的生物活性.結論:原覈錶達的小鼠HMGB1 B box蛋白具有較好的生物活性,為進一步研究HMGB1 B box的作用機製以及新型抗炎製劑的研究奠定瞭基礎.
목적:극륭소서HMGB1 B box기인,표체구유명현치염활성적서HMGB1 B box단백,위심입연구기생물학공능이급신형항염제제적연발전정기출,야위진일보탐토기여H5N1금류감병독성폐염적상관성전정료기출.방법:종소서적폐장조직중제취총RNA,경RT-PCR확증소서HMGB1중적B box적cDNA,구건우재체pMD-18T병진행서렬측정,수후구건우원핵표체재체pET-28a(+)중.IPTG유도4소시후가견Mr약13 000적단백.경Ni2+ 친화층석주순화획득고순도적HMGB1 B box 단백,연후용차단백자격소서외주혈단핵세포(PBMCs),작용6소시후용ELISA검측PBMCs석방TNF-α、IL-6적함량.결과:경RT-PCR확증득도료240 bp적DNA편단,경서렬분석여Genebank 중보도적이지서렬완전일치;성공구건료함유HMGB1 B box편마서렬적원핵표체재체;순화표체적HMGB1 B box단백능현저지자격소서PBMCs석방치염인자TNF-α、IL- 6,구유교호적생물활성.결론:원핵표체적소서HMGB1 B box단백구유교호적생물활성,위진일보연구HMGB1 B box적작용궤제이급신형항염제제적연구전정료기출.
