福建医科大学学报
福建醫科大學學報
복건의과대학학보
JOURNAL OF FUJIAN MEDICAL UNIVERSITY
2009年
3期
198-201
,共4页
骨肉瘤%重组,遗传%克隆,分子%基因,肿瘤抑制%细胞周期蛋白质类%肿瘤细胞,培养的
骨肉瘤%重組,遺傳%剋隆,分子%基因,腫瘤抑製%細胞週期蛋白質類%腫瘤細胞,培養的
골육류%중조,유전%극륭,분자%기인,종류억제%세포주기단백질류%종류세포,배양적
目的 克隆肿瘤转移抑制基因KiSS-1和细胞周期依赖性激酶抑制剂基因p27Kip1的表达序列,应用内部核糖体插入位点(IRES) 序列构建共表达载体pIRES-KiSS-1-p27Kip1,测序鉴定,并获得稳定表达目的 蛋白的细胞株.方法 利用RT-PCR从人正常胎盘组织中获得KiSS-1和p27Kip1基因开放阅读框的cDNA序列,将两目的 基因的cDNA序列重组至pIRES载体,构建共表达载体pIRES-KiSS-1-p27Kip1,应用脂质体转染骨肉瘤MG63细胞,并通过RT-PCR和Western blot检测目的 蛋白的表达情况.结果 经PCR、酶切鉴定和基因序列测定,证实重组入pIRES载体上的两个片段均为目的 基因开放阅读框的核苷酸序列,KiSS-1和p27Kip1蛋白在转染后的细胞中有表达.结论 成功构建共表达载体pIRES-KiSS-1-p27Kip1,获得稳定表达KiSS-1和p27Kip1蛋白的细胞株,为进一步观察目的 基因对骨肉瘤细胞体内外效应奠定基础.
目的 剋隆腫瘤轉移抑製基因KiSS-1和細胞週期依賴性激酶抑製劑基因p27Kip1的錶達序列,應用內部覈糖體插入位點(IRES) 序列構建共錶達載體pIRES-KiSS-1-p27Kip1,測序鑒定,併穫得穩定錶達目的 蛋白的細胞株.方法 利用RT-PCR從人正常胎盤組織中穫得KiSS-1和p27Kip1基因開放閱讀框的cDNA序列,將兩目的 基因的cDNA序列重組至pIRES載體,構建共錶達載體pIRES-KiSS-1-p27Kip1,應用脂質體轉染骨肉瘤MG63細胞,併通過RT-PCR和Western blot檢測目的 蛋白的錶達情況.結果 經PCR、酶切鑒定和基因序列測定,證實重組入pIRES載體上的兩箇片段均為目的 基因開放閱讀框的覈苷痠序列,KiSS-1和p27Kip1蛋白在轉染後的細胞中有錶達.結論 成功構建共錶達載體pIRES-KiSS-1-p27Kip1,穫得穩定錶達KiSS-1和p27Kip1蛋白的細胞株,為進一步觀察目的 基因對骨肉瘤細胞體內外效應奠定基礎.
목적 극륭종류전이억제기인KiSS-1화세포주기의뢰성격매억제제기인p27Kip1적표체서렬,응용내부핵당체삽입위점(IRES) 서렬구건공표체재체pIRES-KiSS-1-p27Kip1,측서감정,병획득은정표체목적 단백적세포주.방법 이용RT-PCR종인정상태반조직중획득KiSS-1화p27Kip1기인개방열독광적cDNA서렬,장량목적 기인적cDNA서렬중조지pIRES재체,구건공표체재체pIRES-KiSS-1-p27Kip1,응용지질체전염골육류MG63세포,병통과RT-PCR화Western blot검측목적 단백적표체정황.결과 경PCR、매절감정화기인서렬측정,증실중조입pIRES재체상적량개편단균위목적 기인개방열독광적핵감산서렬,KiSS-1화p27Kip1단백재전염후적세포중유표체.결론 성공구건공표체재체pIRES-KiSS-1-p27Kip1,획득은정표체KiSS-1화p27Kip1단백적세포주,위진일보관찰목적 기인대골육류세포체내외효응전정기출.
