暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2010年
4期
336-340
,共5页
田红霞%林晨%查显丰%周羽竝%黄欣%高永鹏%李扬秋
田紅霞%林晨%查顯豐%週羽竝%黃訢%高永鵬%李颺鞦
전홍하%림신%사현봉%주우병%황흔%고영붕%리양추
BCR/ABL融合基因%金黄色葡萄球菌肠毒素A%慢性粒细胞白血病%DNA疫苗
BCR/ABL融閤基因%金黃色葡萄毬菌腸毒素A%慢性粒細胞白血病%DNA疫苗
BCR/ABL융합기인%금황색포도구균장독소A%만성립세포백혈병%DNA역묘
目的:构建和表达含BCR/ABL融合基因和葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核双表达质粒.方法:利用RT-PCR技术从K562细胞中扩增出含BCR/ABL融合位点基因片段,提取金黄色葡萄球菌基因组DNA扩增出SEA基因,分别将两基因片段连在pIRES载体的多克隆位点A和B上,构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA- pIRES-BCR/ABL重组质粒.将重组质粒转染K293细胞,RT-PCR鉴定重组质粒在真核细胞的转录情况, SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白在真核细胞的表达.结果:成功扩增出BCR/ABL和 SEA基因片段;双酶切鉴定BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL重组质粒中含有BCR/ABL和SEA基因,测序证实完全正确;将重组质粒转染K293细胞后,经 RT-PCR扩增鉴定,插入到重组质粒的BCR/ABL和SEA基因能在真核细胞正常转录,经SDS-PAGE电泳鉴定重组质粒能够在真核细胞中表达BCR/ABL和SEA蛋白.结论:成功构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL真核双表达质粒,可在真核细胞中正常转录并表达BCR/ABL和SEA蛋白.
目的:構建和錶達含BCR/ABL融閤基因和葡萄毬菌腸毒素A(SEA)的真覈雙錶達質粒.方法:利用RT-PCR技術從K562細胞中擴增齣含BCR/ABL融閤位點基因片段,提取金黃色葡萄毬菌基因組DNA擴增齣SEA基因,分彆將兩基因片段連在pIRES載體的多剋隆位點A和B上,構建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA- pIRES-BCR/ABL重組質粒.將重組質粒轉染K293細胞,RT-PCR鑒定重組質粒在真覈細胞的轉錄情況, SDS-PAGE電泳鑒定目的蛋白在真覈細胞的錶達.結果:成功擴增齣BCR/ABL和 SEA基因片段;雙酶切鑒定BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL重組質粒中含有BCR/ABL和SEA基因,測序證實完全正確;將重組質粒轉染K293細胞後,經 RT-PCR擴增鑒定,插入到重組質粒的BCR/ABL和SEA基因能在真覈細胞正常轉錄,經SDS-PAGE電泳鑒定重組質粒能夠在真覈細胞中錶達BCR/ABL和SEA蛋白.結論:成功構建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL真覈雙錶達質粒,可在真覈細胞中正常轉錄併錶達BCR/ABL和SEA蛋白.
목적:구건화표체함BCR/ABL융합기인화포도구균장독소A(SEA)적진핵쌍표체질립.방법:이용RT-PCR기술종K562세포중확증출함BCR/ABL융합위점기인편단,제취금황색포도구균기인조DNA확증출SEA기인,분별장량기인편단련재pIRES재체적다극륭위점A화B상,구건BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA- pIRES-BCR/ABL중조질립.장중조질립전염K293세포,RT-PCR감정중조질립재진핵세포적전록정황, SDS-PAGE전영감정목적단백재진핵세포적표체.결과:성공확증출BCR/ABL화 SEA기인편단;쌍매절감정BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL중조질립중함유BCR/ABL화SEA기인,측서증실완전정학;장중조질립전염K293세포후,경 RT-PCR확증감정,삽입도중조질립적BCR/ABL화SEA기인능재진핵세포정상전록,경SDS-PAGE전영감정중조질립능구재진핵세포중표체BCR/ABL화SEA단백.결론:성공구건BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL진핵쌍표체질립,가재진핵세포중정상전록병표체BCR/ABL화SEA단백.
