中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2010年
10期
1515-1518
,共4页
朴春姬%田梅%杨巍%李修义
樸春姬%田梅%楊巍%李脩義
박춘희%전매%양외%리수의
重组复制缺陷型腺病毒%A549%转染效率%肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体
重組複製缺陷型腺病毒%A549%轉染效率%腫瘤壞死因子相關誘導凋亡配體
중조복제결함형선병독%A549%전염효솔%종류배사인자상관유도조망배체
目的 研究重组腺病毒感染肺腺癌细胞A549的转染效率及重组腺病毒介导的人可溶性肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(hTRAIL95-281)基因的体外表达.方法 用不同感染滴度(MOI)(0-10 000 VP/cell)的重组腺病毒Ad-CMV-EGFP转染A549细胞后48 h收集细胞,经流式细胞仪检测其转染效率,并在共聚焦荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达;用MOI为5 000 VP/cell的Ad-CMV-EGFP感染肿瘤细胞后不同时间(24 h、48 h、72 h和96 h)收集细胞,经流式细胞仪检测其转染效率;用重组腺病毒Ad-CMV-hTRAIL95-281感染293T细胞后不同时间收集培养物用ELISA方法检测上清中的TRAIL表达.结果 重组腺病毒载体对A549细胞的转染效率和绿色荧光蛋白表达在一定范围内随着MOI的增加而增高,MOI为5 000 VP/cell时转染效率达峰值, MOI为10 000 VP/cell时转染效率反而降低.重组腺病毒转染A549细胞后72 h内转染效率随时间的变化而增高,峰值为98%,96 h有所降低(P<0.05).转染重组腺病毒Ad-CMV-hTRAIL95-281的293T细胞在转染后24 h表达量最高(P<0.001),达到131.45 pg/ml,48 h时TRAIL蛋白表达量明显降低(P<0.01),72小时也有继续降低的趋势.结论 重组腺病毒在适宜的MOI值下,在A549细胞中96小时内均有较高的转染效率,且重组腺病毒介导的可溶性hTRAIL基因在体外能够有效表达.
目的 研究重組腺病毒感染肺腺癌細胞A549的轉染效率及重組腺病毒介導的人可溶性腫瘤壞死因子相關誘導凋亡配體(hTRAIL95-281)基因的體外錶達.方法 用不同感染滴度(MOI)(0-10 000 VP/cell)的重組腺病毒Ad-CMV-EGFP轉染A549細胞後48 h收集細胞,經流式細胞儀檢測其轉染效率,併在共聚焦熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白錶達;用MOI為5 000 VP/cell的Ad-CMV-EGFP感染腫瘤細胞後不同時間(24 h、48 h、72 h和96 h)收集細胞,經流式細胞儀檢測其轉染效率;用重組腺病毒Ad-CMV-hTRAIL95-281感染293T細胞後不同時間收集培養物用ELISA方法檢測上清中的TRAIL錶達.結果 重組腺病毒載體對A549細胞的轉染效率和綠色熒光蛋白錶達在一定範圍內隨著MOI的增加而增高,MOI為5 000 VP/cell時轉染效率達峰值, MOI為10 000 VP/cell時轉染效率反而降低.重組腺病毒轉染A549細胞後72 h內轉染效率隨時間的變化而增高,峰值為98%,96 h有所降低(P<0.05).轉染重組腺病毒Ad-CMV-hTRAIL95-281的293T細胞在轉染後24 h錶達量最高(P<0.001),達到131.45 pg/ml,48 h時TRAIL蛋白錶達量明顯降低(P<0.01),72小時也有繼續降低的趨勢.結論 重組腺病毒在適宜的MOI值下,在A549細胞中96小時內均有較高的轉染效率,且重組腺病毒介導的可溶性hTRAIL基因在體外能夠有效錶達.
목적 연구중조선병독감염폐선암세포A549적전염효솔급중조선병독개도적인가용성종류배사인자상관유도조망배체(hTRAIL95-281)기인적체외표체.방법 용불동감염적도(MOI)(0-10 000 VP/cell)적중조선병독Ad-CMV-EGFP전염A549세포후48 h수집세포,경류식세포의검측기전염효솔,병재공취초형광현미경하관찰록색형광단백표체;용MOI위5 000 VP/cell적Ad-CMV-EGFP감염종류세포후불동시간(24 h、48 h、72 h화96 h)수집세포,경류식세포의검측기전염효솔;용중조선병독Ad-CMV-hTRAIL95-281감염293T세포후불동시간수집배양물용ELISA방법검측상청중적TRAIL표체.결과 중조선병독재체대A549세포적전염효솔화록색형광단백표체재일정범위내수착MOI적증가이증고,MOI위5 000 VP/cell시전염효솔체봉치, MOI위10 000 VP/cell시전염효솔반이강저.중조선병독전염A549세포후72 h내전염효솔수시간적변화이증고,봉치위98%,96 h유소강저(P<0.05).전염중조선병독Ad-CMV-hTRAIL95-281적293T세포재전염후24 h표체량최고(P<0.001),체도131.45 pg/ml,48 h시TRAIL단백표체량명현강저(P<0.01),72소시야유계속강저적추세.결론 중조선병독재괄의적MOI치하,재A549세포중96소시내균유교고적전염효솔,차중조선병독개도적가용성hTRAIL기인재체외능구유효표체.
