重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2010年
11期
1680-1683
,共4页
抑瘤素M%突变体%毕赤酵母%分泌表达
抑瘤素M%突變體%畢赤酵母%分泌錶達
억류소M%돌변체%필적효모%분비표체
目的:构建重组人抑瘤素M突变体(Recombinant human mutant oncostatin M,rhMut-OSM)毕赤酵母分泌表达菌株.方法:将人抑瘤素M蛋白成熟蛋白编码序列同义突变成毕赤酵母偏好密码子,同时将100位和217位Asn突变成Glu,消除糖基化位点,人工合成人抑瘤素突变体基因.将基因直接连接到pPIC9载体信号肽识别序列之后,构建毕赤酵母真核表达载体DPIC9-rhMut-OSM,电转化毕赤酵母菌株GS115,用PCR法筛选阳性克隆,SDS-PAGE和Western blotting方法筛选能够稳定、高效分泌表达rhMut-OSM的酵母工程菌.结果:培养液上清经SDS-PAGE和Western blotting证实获得了相对分子质量约为22kD的rhMut-OSM,实现了非糖基化表达,表达量高峰出现在诱导72h后,摇瓶表达量为400mg/L.结论:成功构建了重组人抑瘤素突变体毕赤酵母工程菌株,能稳定、高效分泌表达rhMut-OSM.
目的:構建重組人抑瘤素M突變體(Recombinant human mutant oncostatin M,rhMut-OSM)畢赤酵母分泌錶達菌株.方法:將人抑瘤素M蛋白成熟蛋白編碼序列同義突變成畢赤酵母偏好密碼子,同時將100位和217位Asn突變成Glu,消除糖基化位點,人工閤成人抑瘤素突變體基因.將基因直接連接到pPIC9載體信號肽識彆序列之後,構建畢赤酵母真覈錶達載體DPIC9-rhMut-OSM,電轉化畢赤酵母菌株GS115,用PCR法篩選暘性剋隆,SDS-PAGE和Western blotting方法篩選能夠穩定、高效分泌錶達rhMut-OSM的酵母工程菌.結果:培養液上清經SDS-PAGE和Western blotting證實穫得瞭相對分子質量約為22kD的rhMut-OSM,實現瞭非糖基化錶達,錶達量高峰齣現在誘導72h後,搖瓶錶達量為400mg/L.結論:成功構建瞭重組人抑瘤素突變體畢赤酵母工程菌株,能穩定、高效分泌錶達rhMut-OSM.
목적:구건중조인억류소M돌변체(Recombinant human mutant oncostatin M,rhMut-OSM)필적효모분비표체균주.방법:장인억류소M단백성숙단백편마서렬동의돌변성필적효모편호밀마자,동시장100위화217위Asn돌변성Glu,소제당기화위점,인공합성인억류소돌변체기인.장기인직접련접도pPIC9재체신호태식별서렬지후,구건필적효모진핵표체재체DPIC9-rhMut-OSM,전전화필적효모균주GS115,용PCR법사선양성극륭,SDS-PAGE화Western blotting방법사선능구은정、고효분비표체rhMut-OSM적효모공정균.결과:배양액상청경SDS-PAGE화Western blotting증실획득료상대분자질량약위22kD적rhMut-OSM,실현료비당기화표체,표체량고봉출현재유도72h후,요병표체량위400mg/L.결론:성공구건료중조인억류소돌변체필적효모공정균주,능은정、고효분비표체rhMut-OSM.
