CAJ | 학술논문

目的在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体.方法利用PCR方法从肠炎沙门菌中扩增出pad基因,构建pET-32a(+)-pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导温度和诱导时间以诱导重组蛋白的表达;以纯化的pad蛋白免疫家兔,制备抗pad多克隆抗体并进行鉴定.结果与结论成功扩增得到pad基因,经双酶切和测序证实重组表达质粒构建成功,经过诱导条件的优化,在大肠杆菌中表达出相对分子质量为41×103的目的蛋白;纯化的重组蛋白免疫家兔后,能够有效地刺激家兔产生特异性抗体,经琼脂糖双向扩散测定抗血清效价达到1∶32以上.为进一步研制沙门菌属体外快速检测试剂打下了基础.
목적 재대장간균중표체사문균속pad단백,순화후제비토항pad항체.방법 이용PCR방법종장염사문균중확증출pad기인,구건pET-32a(+)-pad중조표체질립;장중조표체질립전화지대장간균BL21(DE3)중,사선양성극륭,측서감정후,우화IPTG농도、유도온도화유도시간이유도중조단백적표체;이순화적pad단백면역가토,제비항pad다극륭항체병진행감정.결과 여결론 성공확증득도pad기인,경쌍매절화측서증실중조표체질립구건성공,경과유도조건적우화,재대장간균중표체출상대분자질량위41×103적목적 단백;순화적중조단백면역가토후,능구유효지자격가토산생특이성항체,경경지당쌍향확산측정항혈청효개체도1∶32이상.위진일보연제사문균속체외쾌속검측시제타하료기출.