生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2002年
2期
149-154
,共6页
许祯%姜卫红%焦瑞身%杨蕴刘
許禎%薑衛紅%焦瑞身%楊蘊劉
허정%강위홍%초서신%양온류
皮氏伯克霍尔德氏菌%D-乙内酰脲酶%克隆%表达
皮氏伯剋霍爾德氏菌%D-乙內酰脲酶%剋隆%錶達
피씨백극곽이덕씨균%D-을내선뇨매%극륭%표체
对一株能转化D,L-对羟基苯乙内酰脲为D-对羟基苯甘氨酸的菌株MMR~3进行了细菌分类学鉴定,该菌为皮氏伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapickettii).实验通过Southem杂交,部分文库构建和筛选,并经一系列亚克隆测序分析,获得一长度为1374bp的完整开放阅读框,编码458个氨基酸的D-乙内酰脲酶基因.用该基因序列构建的高表达质粒pXZPH2转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导后,检测到D-乙内酰脲酶活性.该基因编码的氨基酸序列经Blast同源比较分析与放射形土壤杆菌NRRL B11291所产相应酶有85%的同源性.以D,L-对羟基苯乙内酰脲为底物测得的表达酶的活力为0.66u/mL,比相同条件下所测出发菌株MMR003的酶活提高了2倍.
對一株能轉化D,L-對羥基苯乙內酰脲為D-對羥基苯甘氨痠的菌株MMR~3進行瞭細菌分類學鑒定,該菌為皮氏伯剋霍爾德氏菌(Burkholderiapickettii).實驗通過Southem雜交,部分文庫構建和篩選,併經一繫列亞剋隆測序分析,穫得一長度為1374bp的完整開放閱讀框,編碼458箇氨基痠的D-乙內酰脲酶基因.用該基因序列構建的高錶達質粒pXZPH2轉化E.coliBL21(DE3),經IPTG誘導後,檢測到D-乙內酰脲酶活性.該基因編碼的氨基痠序列經Blast同源比較分析與放射形土壤桿菌NRRL B11291所產相應酶有85%的同源性.以D,L-對羥基苯乙內酰脲為底物測得的錶達酶的活力為0.66u/mL,比相同條件下所測齣髮菌株MMR003的酶活提高瞭2倍.
대일주능전화D,L-대간기분을내선뇨위D-대간기분감안산적균주MMR~3진행료세균분류학감정,해균위피씨백극곽이덕씨균(Burkholderiapickettii).실험통과Southem잡교,부분문고구건화사선,병경일계렬아극륭측서분석,획득일장도위1374bp적완정개방열독광,편마458개안기산적D-을내선뇨매기인.용해기인서렬구건적고표체질립pXZPH2전화E.coliBL21(DE3),경IPTG유도후,검측도D-을내선뇨매활성.해기인편마적안기산서렬경Blast동원비교분석여방사형토양간균NRRL B11291소산상응매유85%적동원성.이D,L-대간기분을내선뇨위저물측득적표체매적활력위0.66u/mL,비상동조건하소측출발균주MMR003적매활제고료2배.
