热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2007年
1期
38-41
,共4页
耿艺介%黄达娜%高世同%庾蕾%黄继莲%张仁利
耿藝介%黃達娜%高世同%庾蕾%黃繼蓮%張仁利
경예개%황체나%고세동%유뢰%황계련%장인리
嗜人按蚊%rDNA第2内转录间隔区%聚合酶链反应%单核苷酸多态性
嗜人按蚊%rDNA第2內轉錄間隔區%聚閤酶鏈反應%單覈苷痠多態性
기인안문%rDNA제2내전록간격구%취합매련반응%단핵감산다태성
目的 克隆和分析嗜人按蚊核糖体DNA(rDNA)第2内转录间隔区(ITS2)序列,研究嗜人按蚊rDNA-ITS2序列的种属特异性及不同个体rDNA-ITS2序列的单核苷酸多态性(Single Nuclear Polymorphism,SNP).方法 用DNA提取试剂盒从嗜人按蚊中提取DNA摸板,利用蚊虫5.8S和28S序列的保守性设计特异引物进行聚合酶链反应以扩增嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,扩增产物经回收纯化后连接到TA载体,经amp+LB固体平板筛选的阳性克隆,经amp+LB液体培养基培养后进行PCR鉴定、EcoRI酶切鉴定和序列分析.结果 经PCR反应扩增出全长556 bp的嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,纯化后重组克隆经PCR鉴定可重现556 bp的特异性条带,其酶切产物亦与目的基因PCR产物位置相同.嗜人按蚊6个克隆的同一性为99.6%,其rDNA-ITS2基因单核苷酸存在颠换和插入,在556的范围内有一个A→T,一个G→T的颠换;一个T的插入.结论 嗜人按蚊rDNA-ITS2序列在种间高度保守,但不同个体间也存在一定的SNP多态性.
目的 剋隆和分析嗜人按蚊覈糖體DNA(rDNA)第2內轉錄間隔區(ITS2)序列,研究嗜人按蚊rDNA-ITS2序列的種屬特異性及不同箇體rDNA-ITS2序列的單覈苷痠多態性(Single Nuclear Polymorphism,SNP).方法 用DNA提取試劑盒從嗜人按蚊中提取DNA摸闆,利用蚊蟲5.8S和28S序列的保守性設計特異引物進行聚閤酶鏈反應以擴增嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,擴增產物經迴收純化後連接到TA載體,經amp+LB固體平闆篩選的暘性剋隆,經amp+LB液體培養基培養後進行PCR鑒定、EcoRI酶切鑒定和序列分析.結果 經PCR反應擴增齣全長556 bp的嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,純化後重組剋隆經PCR鑒定可重現556 bp的特異性條帶,其酶切產物亦與目的基因PCR產物位置相同.嗜人按蚊6箇剋隆的同一性為99.6%,其rDNA-ITS2基因單覈苷痠存在顛換和插入,在556的範圍內有一箇A→T,一箇G→T的顛換;一箇T的插入.結論 嗜人按蚊rDNA-ITS2序列在種間高度保守,但不同箇體間也存在一定的SNP多態性.
목적 극륭화분석기인안문핵당체DNA(rDNA)제2내전록간격구(ITS2)서렬,연구기인안문rDNA-ITS2서렬적충속특이성급불동개체rDNA-ITS2서렬적단핵감산다태성(Single Nuclear Polymorphism,SNP).방법 용DNA제취시제합종기인안문중제취DNA모판,이용문충5.8S화28S서렬적보수성설계특이인물진행취합매련반응이확증기인안문rDNA-ITS2기인,확증산물경회수순화후련접도TA재체,경amp+LB고체평판사선적양성극륭,경amp+LB액체배양기배양후진행PCR감정、EcoRI매절감정화서렬분석.결과 경PCR반응확증출전장556 bp적기인안문rDNA-ITS2기인,순화후중조극륭경PCR감정가중현556 bp적특이성조대,기매절산물역여목적기인PCR산물위치상동.기인안문6개극륭적동일성위99.6%,기rDNA-ITS2기인단핵감산존재전환화삽입,재556적범위내유일개A→T,일개G→T적전환;일개T적삽입.결론 기인안문rDNA-ITS2서렬재충간고도보수,단불동개체간야존재일정적SNP다태성.
