中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2007年
2期
108-111
,共4页
赵益明%邵波静%董宁征%沈飞%阮长耿
趙益明%邵波靜%董寧徵%瀋飛%阮長耿
조익명%소파정%동저정%침비%원장경
CHO细胞%重组糖蛋白Ibα%表达%纯化
CHO細胞%重組糖蛋白Ibα%錶達%純化
CHO세포%중조당단백Ibα%표체%순화
目的:建立表达重组糖蛋白Ibα活性片段(rGPIbαH1-V289)细胞株,并且纯化其表达产物,研究其生物学功能.方法:利用脂质体将含有编码GPIbαH1-V289 的DNA质粒pCMV3转染CHO细胞.用亲和层析法纯化重组片段.用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化产品的纯度和免疫学活性.用血小板聚集法检测纯化产品对瑞斯托霉素诱导血小板聚集功能的影响.用ELISA测定纯化产品对vWF与血小板结合能力的影响.结果:每1 L培养上清液可纯化到6.15 mg rGPIbαH1-V289重组产品.SDS-PAGE显示,纯化的重组片段主要在42 kD处显一蛋白区带,Western blot显示,抗GPIbα单抗SZ-2能与重组片段在42 kD处显单一蛋白区带.纯化重组片段能抑制瑞斯托霉素诱导的血小板聚集功能.ELISA测定显示纯化产品抑制血浆vWF与血小板的结合能力.结论:CHO细胞株A1能恒定表达rGPIbαH1-V289,重组片段具有较高的纯度、免疫学活性和生物学活性,有可能开发为有效的抗血栓药物.
目的:建立錶達重組糖蛋白Ibα活性片段(rGPIbαH1-V289)細胞株,併且純化其錶達產物,研究其生物學功能.方法:利用脂質體將含有編碼GPIbαH1-V289 的DNA質粒pCMV3轉染CHO細胞.用親和層析法純化重組片段.用SDS-PAGE和Western blot鑒定純化產品的純度和免疫學活性.用血小闆聚集法檢測純化產品對瑞斯託黴素誘導血小闆聚集功能的影響.用ELISA測定純化產品對vWF與血小闆結閤能力的影響.結果:每1 L培養上清液可純化到6.15 mg rGPIbαH1-V289重組產品.SDS-PAGE顯示,純化的重組片段主要在42 kD處顯一蛋白區帶,Western blot顯示,抗GPIbα單抗SZ-2能與重組片段在42 kD處顯單一蛋白區帶.純化重組片段能抑製瑞斯託黴素誘導的血小闆聚集功能.ELISA測定顯示純化產品抑製血漿vWF與血小闆的結閤能力.結論:CHO細胞株A1能恆定錶達rGPIbαH1-V289,重組片段具有較高的純度、免疫學活性和生物學活性,有可能開髮為有效的抗血栓藥物.
목적:건립표체중조당단백Ibα활성편단(rGPIbαH1-V289)세포주,병차순화기표체산물,연구기생물학공능.방법:이용지질체장함유편마GPIbαH1-V289 적DNA질립pCMV3전염CHO세포.용친화층석법순화중조편단.용SDS-PAGE화Western blot감정순화산품적순도화면역학활성.용혈소판취집법검측순화산품대서사탁매소유도혈소판취집공능적영향.용ELISA측정순화산품대vWF여혈소판결합능력적영향.결과:매1 L배양상청액가순화도6.15 mg rGPIbαH1-V289중조산품.SDS-PAGE현시,순화적중조편단주요재42 kD처현일단백구대,Western blot현시,항GPIbα단항SZ-2능여중조편단재42 kD처현단일단백구대.순화중조편단능억제서사탁매소유도적혈소판취집공능.ELISA측정현시순화산품억제혈장vWF여혈소판적결합능력.결론:CHO세포주A1능항정표체rGPIbαH1-V289,중조편단구유교고적순도、면역학활성화생물학활성,유가능개발위유효적항혈전약물.
