水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2008年
3期
308-313
,共6页
韩建山%龙燕%孟小林%徐进平%鲁伟%王健
韓建山%龍燕%孟小林%徐進平%魯偉%王健
한건산%룡연%맹소림%서진평%로위%왕건
鲤鱼生长激素(GH)%对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28%gh+vp28%毕赤酵母%促生长%抗病毒
鯉魚生長激素(GH)%對蝦白斑綜閤病毒(WSSV)VP28%gh+vp28%畢赤酵母%促生長%抗病毒
리어생장격소(GH)%대하백반종합병독(WSSV)VP28%gh+vp28%필적효모%촉생장%항병독
鲤鱼生长激素GH是鲤鱼生长腺体分泌并促进鲤鱼生长的一种分泌蛋白.对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28蛋白为囊膜蛋白,是病毒感染宿主的必需因子.根据gh和vp28的上下游序列,分别设计合成两对引物,PCR扩增gh和vp28基因,将基因gh和vp28按先后次序融合后插入穿梭质粒pPIC6αC多克隆位点,构建成重组分泌表达穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28),用Bstx1单酶切穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28)线形化,转化毕赤酵母X-33.重组菌株30℃甲醇诱导,实现在酵母中的融合分泌表达,获得融合蛋白.表达产物经SDS-PAGE检测和Western Blot印迹鉴定,显示与预期大小66kD相吻合的融合蛋白带.用Ni2+-柱纯化后的基因工程蛋白注射鳌虾进行蛋白生物功能测试,结果表明该蛋白获得了促鳌虾生长和抗WSSV感染的双重功效.
鯉魚生長激素GH是鯉魚生長腺體分泌併促進鯉魚生長的一種分泌蛋白.對蝦白斑綜閤病毒(WSSV)VP28蛋白為囊膜蛋白,是病毒感染宿主的必需因子.根據gh和vp28的上下遊序列,分彆設計閤成兩對引物,PCR擴增gh和vp28基因,將基因gh和vp28按先後次序融閤後插入穿梭質粒pPIC6αC多剋隆位點,構建成重組分泌錶達穿梭質粒pPIC6αC-(gh+vp28),用Bstx1單酶切穿梭質粒pPIC6αC-(gh+vp28)線形化,轉化畢赤酵母X-33.重組菌株30℃甲醇誘導,實現在酵母中的融閤分泌錶達,穫得融閤蛋白.錶達產物經SDS-PAGE檢測和Western Blot印跡鑒定,顯示與預期大小66kD相吻閤的融閤蛋白帶.用Ni2+-柱純化後的基因工程蛋白註射鼇蝦進行蛋白生物功能測試,結果錶明該蛋白穫得瞭促鼇蝦生長和抗WSSV感染的雙重功效.
리어생장격소GH시리어생장선체분비병촉진리어생장적일충분비단백.대하백반종합병독(WSSV)VP28단백위낭막단백,시병독감염숙주적필수인자.근거gh화vp28적상하유서렬,분별설계합성량대인물,PCR확증gh화vp28기인,장기인gh화vp28안선후차서융합후삽입천사질립pPIC6αC다극륭위점,구건성중조분비표체천사질립pPIC6αC-(gh+vp28),용Bstx1단매절천사질립pPIC6αC-(gh+vp28)선형화,전화필적효모X-33.중조균주30℃갑순유도,실현재효모중적융합분비표체,획득융합단백.표체산물경SDS-PAGE검측화Western Blot인적감정,현시여예기대소66kD상문합적융합단백대.용Ni2+-주순화후적기인공정단백주사오하진행단백생물공능측시,결과표명해단백획득료촉오하생장화항WSSV감염적쌍중공효.
