T淋巴细胞活化相关的microRNA的筛选、靶分子的预测、构建和鉴定
T림파세포활화상관적microRNA적사선、파분자적예측、구건화감정
  • 万方数据
    细胞与分子免疫学杂志 세포여분자면역학잡지

    2009年 8期 751-753 ,共3页

    李伟%薛茜%郭张燕%王涛%温伟红%韩涛%孟艳玲%杨安钢

    리위%설천%곽장연%왕도%온위홍%한도%맹염령%양안강

    microRNA(miRNA)%实时定量PCR%T细胞活化%靶分子%双荧光素酶实验 microRNA(miRNA)%實時定量PCR%T細胞活化%靶分子%雙熒光素酶實驗
    microRNA(miRNA)%실시정량PCR%T세포활화%파분자%쌍형광소매실험
    目的: 筛选T细胞活化相关的microRNA并预测其靶分子,通过双荧光素酶实验鉴定这些microRNA的靶分子方法: 利用Exiqon miRNA基因表达谱芯片,以活化的Jurkat细胞(用CD3抗体和CD28抗体双信号活化)为实验组,未活化Jurkat细胞为对照组,分析了二者miRNA表达谱的差异,找出表达水平显著改变的miRNA,并通过实时定量PCR的方法对芯片结果进行验证;构建miRNA的真核表达载体;利用生物信息学方法预测miRNA的靶分子,构建含靶分子3′UTR的荧光素酶报告基因质粒;分别将miRNA基因真核表达质粒与含有靶分子的荧光素酶报告基因质粒共转染HEK293细胞,进行荧光素酶实验来鉴定miRNA的靶分子结果: Exiqon miRNA基因表达谱芯片显示: Jurkat细胞活化后,miR-202*、 miR-33b、 miR-568和miR-576的表达明显下调;实时定量PCR验证结果与芯片结果一致;酶切鉴定与序列测定证实miR-568的真核表达载体构建成功;利用miRanda软件预测miR-568的靶分子,筛选出与T细胞活化密切相关的分子;双荧光素酶实验显示miR-568对NFAT5有比较明显的抑制作用结论: T细胞活化后,miR-202*、 miR-33b、 miR-568和miR-576表达明显下调;NFAT5可能是miR-568作用的一个靶分子
    목적: 사선T세포활화상관적microRNA병예측기파분자,통과쌍형광소매실험감정저사microRNA적파분자방법: 이용Exiqon miRNA기인표체보심편,이활화적Jurkat세포(용CD3항체화CD28항체쌍신호활화)위실험조,미활화Jurkat세포위대조조,분석료이자miRNA표체보적차이,조출표체수평현저개변적miRNA,병통과실시정량PCR적방법대심편결과진행험증;구건miRNA적진핵표체재체;이용생물신식학방법예측miRNA적파분자,구건함파분자3′UTR적형광소매보고기인질립;분별장miRNA기인진핵표체질립여함유파분자적형광소매보고기인질립공전염HEK293세포,진행형광소매실험래감정miRNA적파분자결과: Exiqon miRNA기인표체보심편현시: Jurkat세포활화후,miR-202*、 miR-33b、 miR-568화miR-576적표체명현하조;실시정량PCR험증결과여심편결과일치;매절감정여서렬측정증실miR-568적진핵표체재체구건성공;이용miRanda연건예측miR-568적파분자,사선출여T세포활화밀절상관적분자;쌍형광소매실험현시miR-568대NFAT5유비교명현적억제작용결론: T세포활화후,miR-202*、 miR-33b、 miR-568화miR-576표체명현하조;NFAT5가능시miR-568작용적일개파분자
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