生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
12期
175-180,198
,共7页
丙酮酸羧化酶%草酰乙酸%L-苹果酸%pPIC3.5K%毕赤酵母
丙酮痠羧化酶%草酰乙痠%L-蘋果痠%pPIC3.5K%畢赤酵母
병동산최화매%초선을산%L-평과산%pPIC3.5K%필적효모
旨在研究丙酮酸羧化酶胞质同工酶(PC)基因在毕赤酵母中的过量表达对TCA还原途径碳源分流及草酰乙酸、L-苹果酸生产的影响,构建了表达载体pPIC3.5K-PC,并转化了毕赤酵母GS115.转化子经过表型鉴定,PCR分析和G418浓度梯度筛选获得了高拷贝的重组子( pas-01).甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE分析及PC活性检测,发现酶活提高了3倍,说明PC在毕赤酵母中获得了成功表达.以pPIC3.SK转化菌为对照,对该重组子进行了草酰乙酸及苹果酸的发酵研究.结果显示,草酰乙酸产量( 177.4 mg/L)提高了109.6％,L-苹果酸的产量(127.45 mg/L)提高33.7％,菌体生物量提高15.7％,表明PC的过量表达有助于L-苹果酸和草酰乙酸的积累,并且对菌体的生长有一定的促进作用.
旨在研究丙酮痠羧化酶胞質同工酶(PC)基因在畢赤酵母中的過量錶達對TCA還原途徑碳源分流及草酰乙痠、L-蘋果痠生產的影響,構建瞭錶達載體pPIC3.5K-PC,併轉化瞭畢赤酵母GS115.轉化子經過錶型鑒定,PCR分析和G418濃度梯度篩選穫得瞭高拷貝的重組子( pas-01).甲醇誘導錶達後,經SDS-PAGE分析及PC活性檢測,髮現酶活提高瞭3倍,說明PC在畢赤酵母中穫得瞭成功錶達.以pPIC3.SK轉化菌為對照,對該重組子進行瞭草酰乙痠及蘋果痠的髮酵研究.結果顯示,草酰乙痠產量( 177.4 mg/L)提高瞭109.6％,L-蘋果痠的產量(127.45 mg/L)提高33.7％,菌體生物量提高15.7％,錶明PC的過量錶達有助于L-蘋果痠和草酰乙痠的積纍,併且對菌體的生長有一定的促進作用.
지재연구병동산최화매포질동공매(PC)기인재필적효모중적과량표체대TCA환원도경탄원분류급초선을산、L-평과산생산적영향,구건료표체재체pPIC3.5K-PC,병전화료필적효모GS115.전화자경과표형감정,PCR분석화G418농도제도사선획득료고고패적중조자( pas-01).갑순유도표체후,경SDS-PAGE분석급PC활성검측,발현매활제고료3배,설명PC재필적효모중획득료성공표체.이pPIC3.SK전화균위대조,대해중조자진행료초선을산급평과산적발효연구.결과현시,초선을산산량( 177.4 mg/L)제고료109.6％,L-평과산적산량(127.45 mg/L)제고33.7％,균체생물량제고15.7％,표명PC적과량표체유조우L-평과산화초선을산적적루,병차대균체적생장유일정적촉진작용.
