CAJ | 학술논문

目的比较几种常用大肠杆菌感受态制备方法,探讨影响pBV220-PTD-tCNTF转化大肠杆菌感受态细胞的因素并得出最优水平组合.方法采用4种制备感受态细胞的方法即CaCl2法,CaCl2 -甘油法,TSSG法和INOUE法,比较4种方法制备的感受态细胞即时和-80C保存30 d对质粒PBV220-PTD-tCNTF的转化效率；L8(27)正交设计研究Mg2+、INOUE重悬液、PEG、甘油和DMSO对pBV220-PTD-tCNTF转化大肠杆菌感受态的影响；对得出的最佳水平组合进行验证并对转化好的细胞进行测序验证.结果 CaC12 法,CaCl2-甘油法,TSSG法,INOUE法4种方法的转化率分别为:(5.43 ±0.72)×106、(7.45±0.65)×106、(9.71±1.81)×106、(8.52±1.22) ×10 7；-80℃保存30 d的转化效率为:(6.20 ±0.31)×104、(6.57±0.97)×106、(9.76±1.31)×106、(1.63±0.019)×106；正交结果Mg2+(A)、INOUE重悬液(B)、PEG(C)、甘油(D)和DMSO(E)各因素的P值分别为0.0357、0.0154、0.0677、0.2503和0.1749；最佳水平组合实施的转化率为( 29.63±4.95) ×107并经测序确定转入质粒的正确性.结论分析出各因素对pBV220-PTD-tCNTF转化感受态细胞转化率的影响程度,得出了其最佳水平组合A1B1C1D2E1,并得到了(29.63±4.95) ×10 7的转化效率.
목적 비교궤충상용대장간균감수태제비방법,탐토영향pBV220-PTD-tCNTF전화대장간균감수태세포적인소병득출최우수평조합.방법 채용4충제비감수태세포적방법즉CaCl2법,CaCl2 -감유법,TSSG법화INOUE법,비교4충방법제비적감수태세포즉시화-80C보존30 d대질립PBV220-PTD-tCNTF적전화효솔；L8(27)정교설계연구Mg2+、INOUE중현액、PEG、감유화DMSO대pBV220-PTD-tCNTF전화대장간균감수태적영향；대득출적최가수평조합진행험증병대전화호적세포진행측서험증.결과 CaC12 법,CaCl2-감유법,TSSG법,INOUE법4충방법적전화솔분별위:(5.43 ±0.72)×106、(7.45±0.65)×106、(9.71±1.81)×106、(8.52±1.22) ×10 7；-80℃보존30 d적전화효솔위:(6.20 ±0.31)×104、(6.57±0.97)×106、(9.76±1.31)×106、(1.63±0.019)×106；정교결과Mg2+(A)、INOUE중현액(B)、PEG(C)、감유(D)화DMSO(E)각인소적P치분별위0.0357、0.0154、0.0677、0.2503화0.1749；최가수평조합실시적전화솔위( 29.63±4.95) ×107병경측서학정전입질립적정학성.결론 분석출각인소대pBV220-PTD-tCNTF전화감수태세포전화솔적영향정도,득출료기최가수평조합A1B1C1D2E1,병득도료(29.63±4.95) ×10 7적전화효솔.