生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2003年
2期
217-222
,共6页
杨健%王跃祥%官孝群%马春姑%王龙生%宋后燕
楊健%王躍祥%官孝群%馬春姑%王龍生%宋後燕
양건%왕약상%관효군%마춘고%왕룡생%송후연
新生血管生成抑制因子K5%腺病毒%基因治疗
新生血管生成抑製因子K5%腺病毒%基因治療
신생혈관생성억제인자K5%선병독%기인치료
应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5 cDNA基因,与真核表达载体pcDNA3重组,形成重组质粒pcDNA3K5,与穿梭质粒pShuttle 重组得pShuttleK5,经与腺病毒DNA重组,PCR鉴定正确,即为pAd-K5.脂质体法将其转染293细胞后,制备细胞裂解液;噬斑分析法测定病毒滴度为5×108 pfu/mL.将病毒以不同的感染系数(MOI)感染人脐静脉内皮细胞株ECV304和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT法检测两者的增殖情况:ECV304细胞增殖受抑制,而MDA-MB-231细胞增殖未受明显影响.将感染病毒的ECV304细胞接种于ECMatrixTM胶,显示内皮细胞分化和毛细血管管腔形成受抑制.表明所构建的含人纤溶酶原K5基因的重组复制缺陷型腺病毒具有抑制ECV304细胞增殖、分化和管腔形成的作用而对MDA-MB-231细胞的生长则无影响.
應用PCR將人纖溶酶原信號肽序列引入K5 cDNA基因,與真覈錶達載體pcDNA3重組,形成重組質粒pcDNA3K5,與穿梭質粒pShuttle 重組得pShuttleK5,經與腺病毒DNA重組,PCR鑒定正確,即為pAd-K5.脂質體法將其轉染293細胞後,製備細胞裂解液;噬斑分析法測定病毒滴度為5×108 pfu/mL.將病毒以不同的感染繫數(MOI)感染人臍靜脈內皮細胞株ECV304和人乳腺癌細胞株MDA-MB-231,MTT法檢測兩者的增殖情況:ECV304細胞增殖受抑製,而MDA-MB-231細胞增殖未受明顯影響.將感染病毒的ECV304細胞接種于ECMatrixTM膠,顯示內皮細胞分化和毛細血管管腔形成受抑製.錶明所構建的含人纖溶酶原K5基因的重組複製缺陷型腺病毒具有抑製ECV304細胞增殖、分化和管腔形成的作用而對MDA-MB-231細胞的生長則無影響.
응용PCR장인섬용매원신호태서렬인입K5 cDNA기인,여진핵표체재체pcDNA3중조,형성중조질립pcDNA3K5,여천사질립pShuttle 중조득pShuttleK5,경여선병독DNA중조,PCR감정정학,즉위pAd-K5.지질체법장기전염293세포후,제비세포렬해액;서반분석법측정병독적도위5×108 pfu/mL.장병독이불동적감염계수(MOI)감염인제정맥내피세포주ECV304화인유선암세포주MDA-MB-231,MTT법검측량자적증식정황:ECV304세포증식수억제,이MDA-MB-231세포증식미수명현영향.장감염병독적ECV304세포접충우ECMatrixTM효,현시내피세포분화화모세혈관관강형성수억제.표명소구건적함인섬용매원K5기인적중조복제결함형선병독구유억제ECV304세포증식、분화화관강형성적작용이대MDA-MB-231세포적생장칙무영향.
