细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
3期
242-245
,共4页
曹伟%郝志勇%郗雪艳%孔燕%马驰%崔莲仙%何维
曹偉%郝誌勇%郗雪豔%孔燕%馬馳%崔蓮仙%何維
조위%학지용%치설염%공연%마치%최련선%하유
ULBP4%NKG2D%IFN-γ%Rosetta-gamiTMB(DE3)大肠杆菌%表达%生物学功能%单克隆抗体
ULBP4%NKG2D%IFN-γ%Rosetta-gamiTMB(DE3)大腸桿菌%錶達%生物學功能%單剋隆抗體
ULBP4%NKG2D%IFN-γ%Rosetta-gamiTMB(DE3)대장간균%표체%생물학공능%단극륭항체
目的:在大肠杆菌中表达ULBP4重组蛋白, 并制备其特异性的单克隆抗体(mAb), 为γδT细胞对ULBP4的识别机制研究奠定基础.方法:根据GenBank中ULBP4的基因序列设计相应的引物, 用RT-PCR方法从HO-8910细胞中扩增得到ULBP4片段, 构建重组原核表达质粒pET22b(+)/ULBP4(前225aa胞外段), 在Rosetta-gamiTMB(DE3)大肠杆菌中获得表达且主要位于包含体中, 经纯化透析复性后, 分析其对NK细胞IFN-γ细胞因子分泌的影响.以ULBP4为抗原, 免疫BALB/c小鼠, 取免疫小鼠脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合, 依次经HAT选择培养、间接ELISA法、克隆化培养、荧光免疫检测和流式细胞术以及Western blot筛选和鉴定抗ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株.结果:构建了pET22b(+)/ULBP4(225aa)原核表达体系, 并检测到重组蛋白的有效表达; 纯化的重组蛋白在体外培养体系中可以刺激NK细胞IFN-γ细胞因子的分泌.此外, 还获得了4株可稳定分泌抗人ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株.结论:成功地构建并表达了具有生物活性的ULBP4, 为γδT细胞的识别机制研究建立抗原制备平台, 同时所制备的抗人ULBP4 mAb, 为后续研究奠定了基础.
目的:在大腸桿菌中錶達ULBP4重組蛋白, 併製備其特異性的單剋隆抗體(mAb), 為γδT細胞對ULBP4的識彆機製研究奠定基礎.方法:根據GenBank中ULBP4的基因序列設計相應的引物, 用RT-PCR方法從HO-8910細胞中擴增得到ULBP4片段, 構建重組原覈錶達質粒pET22b(+)/ULBP4(前225aa胞外段), 在Rosetta-gamiTMB(DE3)大腸桿菌中穫得錶達且主要位于包含體中, 經純化透析複性後, 分析其對NK細胞IFN-γ細胞因子分泌的影響.以ULBP4為抗原, 免疫BALB/c小鼠, 取免疫小鼠脾細胞和Sp2/0骨髓瘤細胞常規融閤, 依次經HAT選擇培養、間接ELISA法、剋隆化培養、熒光免疫檢測和流式細胞術以及Western blot篩選和鑒定抗ULBP4 mAb的雜交瘤細胞株.結果:構建瞭pET22b(+)/ULBP4(225aa)原覈錶達體繫, 併檢測到重組蛋白的有效錶達; 純化的重組蛋白在體外培養體繫中可以刺激NK細胞IFN-γ細胞因子的分泌.此外, 還穫得瞭4株可穩定分泌抗人ULBP4 mAb的雜交瘤細胞株.結論:成功地構建併錶達瞭具有生物活性的ULBP4, 為γδT細胞的識彆機製研究建立抗原製備平檯, 同時所製備的抗人ULBP4 mAb, 為後續研究奠定瞭基礎.
목적:재대장간균중표체ULBP4중조단백, 병제비기특이성적단극륭항체(mAb), 위γδT세포대ULBP4적식별궤제연구전정기출.방법:근거GenBank중ULBP4적기인서렬설계상응적인물, 용RT-PCR방법종HO-8910세포중확증득도ULBP4편단, 구건중조원핵표체질립pET22b(+)/ULBP4(전225aa포외단), 재Rosetta-gamiTMB(DE3)대장간균중획득표체차주요위우포함체중, 경순화투석복성후, 분석기대NK세포IFN-γ세포인자분비적영향.이ULBP4위항원, 면역BALB/c소서, 취면역소서비세포화Sp2/0골수류세포상규융합, 의차경HAT선택배양、간접ELISA법、극륭화배양、형광면역검측화류식세포술이급Western blot사선화감정항ULBP4 mAb적잡교류세포주.결과:구건료pET22b(+)/ULBP4(225aa)원핵표체체계, 병검측도중조단백적유효표체; 순화적중조단백재체외배양체계중가이자격NK세포IFN-γ세포인자적분비.차외, 환획득료4주가은정분비항인ULBP4 mAb적잡교류세포주.결론:성공지구건병표체료구유생물활성적ULBP4, 위γδT세포적식별궤제연구건립항원제비평태, 동시소제비적항인ULBP4 mAb, 위후속연구전정료기출.
