福建医科大学学报
福建醫科大學學報
복건의과대학학보
JOURNAL OF FUJIAN MEDICAL UNIVERSITY
2009年
1期
45-48
,共4页
戴琳孙%林旎%陈勇%江凌%程祖建%欧启水
戴琳孫%林旎%陳勇%江凌%程祖建%歐啟水
대림손%림니%진용%강릉%정조건%구계수
细胞荚膜%隐球菌,新型%真菌蛋白质类%逆转录聚合酶链反应%mRNA,信使
細胞莢膜%隱毬菌,新型%真菌蛋白質類%逆轉錄聚閤酶鏈反應%mRNA,信使
세포협막%은구균,신형%진균단백질류%역전록취합매련반응%mRNA,신사
目的 建立荧光定量PCR(FQ-PCR)技术定量检测新型隐球菌(CN)的荚膜相关蛋白10(CAP10)基因mRNA,为新型隐球菌的诊断、预后及疗效判断提供依据.方法 用逆转录PCR的方法从CN标准株(ATCC34874)中扩增得到CAP10,构建重组质粒标准品pGEMT-Easy-CAP10,以倍比稀释的标准品制备标准曲线.设计引物和探针,建立FQ-PCR反应体系并对其重复性、特异性和线性范围进行评价.结果 成功构建了重组质粒标准品pGEMT-Easy-CAP10,并用倍比稀释的标准品制备了标准曲线Y=-3.11X+38.84.批内重复性试验CV值为0.31%,批间重复性试验CV值为2.73%.FQ-PCR体系能特异扩增新型隐球菌,特异性好,该体系的线性范围为101copies/μL～108 copies/μL.结论 成功建立CN的CAP10 mRNA的定量检测方法;该方法重复性好,特异性强.
目的 建立熒光定量PCR(FQ-PCR)技術定量檢測新型隱毬菌(CN)的莢膜相關蛋白10(CAP10)基因mRNA,為新型隱毬菌的診斷、預後及療效判斷提供依據.方法 用逆轉錄PCR的方法從CN標準株(ATCC34874)中擴增得到CAP10,構建重組質粒標準品pGEMT-Easy-CAP10,以倍比稀釋的標準品製備標準麯線.設計引物和探針,建立FQ-PCR反應體繫併對其重複性、特異性和線性範圍進行評價.結果 成功構建瞭重組質粒標準品pGEMT-Easy-CAP10,併用倍比稀釋的標準品製備瞭標準麯線Y=-3.11X+38.84.批內重複性試驗CV值為0.31%,批間重複性試驗CV值為2.73%.FQ-PCR體繫能特異擴增新型隱毬菌,特異性好,該體繫的線性範圍為101copies/μL～108 copies/μL.結論 成功建立CN的CAP10 mRNA的定量檢測方法;該方法重複性好,特異性彊.
목적 건립형광정량PCR(FQ-PCR)기술정량검측신형은구균(CN)적협막상관단백10(CAP10)기인mRNA,위신형은구균적진단、예후급료효판단제공의거.방법 용역전록PCR적방법종CN표준주(ATCC34874)중확증득도CAP10,구건중조질립표준품pGEMT-Easy-CAP10,이배비희석적표준품제비표준곡선.설계인물화탐침,건립FQ-PCR반응체계병대기중복성、특이성화선성범위진행평개.결과 성공구건료중조질립표준품pGEMT-Easy-CAP10,병용배비희석적표준품제비료표준곡선Y=-3.11X+38.84.비내중복성시험CV치위0.31%,비간중복성시험CV치위2.73%.FQ-PCR체계능특이확증신형은구균,특이성호,해체계적선성범위위101copies/μL～108 copies/μL.결론 성공건립CN적CAP10 mRNA적정량검측방법;해방법중복성호,특이성강.
