山西大学学报（自然科学版）
山西大學學報（自然科學版）
산서대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHANXI UNIVERSITY
2012年
2期
376-382
,共7页
柴宝峰%常文娟%申泉%王刚
柴寶峰%常文娟%申泉%王剛
시보봉%상문연%신천%왕강
NMD途径%UPF1%SMG1%PTC%RNA干扰%shRNA
NMD途徑%UPF1%SMG1%PTC%RNA榦擾%shRNA
NMD도경%UPF1%SMG1%PTC%RNA간우%shRNA
无义介导的mRNA降解途径是一个比较完善的异常mRNA的降解机制,结合在外显子拼接复合体上的多种蛋白决定NMD途径对异常转录物的识别和降解的启动,其中UPF1和SMG1发挥主要功能.UPF1是一个RNA解旋酶和RNA依赖的ATP酶；而SMG1具有磷脂酰肌醇激酶活性,负责UPF1的磷酸化.本研究构建了含有UPF1和SMG-1基因发夹结构的诱导开关基因表达干扰质粒.利用慢病毒介导转化哺乳动物细胞HEK293T细胞得到重组病毒,经鉴定后感染细胞AD_293,目的基因在细胞中得以高效表达.通过继代培养和单克隆化,得到强力霉素诱导干扰UPF1和SMG-1表达的稳定细胞株.
無義介導的mRNA降解途徑是一箇比較完善的異常mRNA的降解機製,結閤在外顯子拼接複閤體上的多種蛋白決定NMD途徑對異常轉錄物的識彆和降解的啟動,其中UPF1和SMG1髮揮主要功能.UPF1是一箇RNA解鏇酶和RNA依賴的ATP酶；而SMG1具有燐脂酰肌醇激酶活性,負責UPF1的燐痠化.本研究構建瞭含有UPF1和SMG-1基因髮夾結構的誘導開關基因錶達榦擾質粒.利用慢病毒介導轉化哺乳動物細胞HEK293T細胞得到重組病毒,經鑒定後感染細胞AD_293,目的基因在細胞中得以高效錶達.通過繼代培養和單剋隆化,得到彊力黴素誘導榦擾UPF1和SMG-1錶達的穩定細胞株.
무의개도적mRNA강해도경시일개비교완선적이상mRNA적강해궤제,결합재외현자병접복합체상적다충단백결정NMD도경대이상전록물적식별화강해적계동,기중UPF1화SMG1발휘주요공능.UPF1시일개RNA해선매화RNA의뢰적ATP매；이SMG1구유린지선기순격매활성,부책UPF1적린산화.본연구구건료함유UPF1화SMG-1기인발협결구적유도개관기인표체간우질립.이용만병독개도전화포유동물세포HEK293T세포득도중조병독,경감정후감염세포AD_293,목적기인재세포중득이고효표체.통과계대배양화단극륭화,득도강력매소유도간우UPF1화SMG-1표체적은정세포주.
