中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2012年
12期
2544-2546
,共3页
蔡哲%石超%范林洋%李晓阳%杨春蕾
蔡哲%石超%範林洋%李曉暘%楊春蕾
채철%석초%범림양%리효양%양춘뢰
细胞衰老%MORF4基因%PCNA%细胞增殖
細胞衰老%MORF4基因%PCNA%細胞增殖
세포쇠로%MORF4기인%PCNA%세포증식
目的 建立MORF4基因高表达诱导HeLa细胞衰老模型,探索MORF4基因对HeLa细胞衰老的影响.方法 分别将pcDNA3.1(+ )/Flag-MORF4和pcDNA3.1(+)空载质粒转染人宫颈癌HeLa细胞株.SA-β-Gal染色检测细胞衰老,MTT法及流式细胞术检测细胞周期变化及细胞的增殖活力,两者共同确定MG-132处理的最适条件.Western印迹检测MORF4、PCNA基因的表达.结果 质粒经酶切和测序鉴定,证明pcDNA3.1(+ )/Flag-MORF4质粒中含有目的基因序列；经浓度梯度l.25、2.5、5、10 μmol/L MG-132处理转染细胞2、4、24、48 h后,SA-β-Gal染色和MTT 检测结果显示10 μmol/L MG-132处理24 h的转染细胞明显衰老,细胞活力降低；细胞周期被阻滞在Go/G1期,S期细胞明显减少,增殖受到抑制；Western印迹检测结果显示MORF4蛋白在细胞中的含量明显升高,而与增殖相关基因PCNA表达下调.结论 构建的pcDNA3.1(+)/Flag-MORF4 质粒在HeLa细胞中表达；并在MG-132作用下,使MORF4基因的表达产物积累,从而影响PCNA蛋白的表达量,抑制HeLa细胞的增殖活性,阻滞细胞周期的进行,导致细胞进入衰老状态.
目的 建立MORF4基因高錶達誘導HeLa細胞衰老模型,探索MORF4基因對HeLa細胞衰老的影響.方法 分彆將pcDNA3.1(+ )/Flag-MORF4和pcDNA3.1(+)空載質粒轉染人宮頸癌HeLa細胞株.SA-β-Gal染色檢測細胞衰老,MTT法及流式細胞術檢測細胞週期變化及細胞的增殖活力,兩者共同確定MG-132處理的最適條件.Western印跡檢測MORF4、PCNA基因的錶達.結果 質粒經酶切和測序鑒定,證明pcDNA3.1(+ )/Flag-MORF4質粒中含有目的基因序列；經濃度梯度l.25、2.5、5、10 μmol/L MG-132處理轉染細胞2、4、24、48 h後,SA-β-Gal染色和MTT 檢測結果顯示10 μmol/L MG-132處理24 h的轉染細胞明顯衰老,細胞活力降低；細胞週期被阻滯在Go/G1期,S期細胞明顯減少,增殖受到抑製；Western印跡檢測結果顯示MORF4蛋白在細胞中的含量明顯升高,而與增殖相關基因PCNA錶達下調.結論 構建的pcDNA3.1(+)/Flag-MORF4 質粒在HeLa細胞中錶達；併在MG-132作用下,使MORF4基因的錶達產物積纍,從而影響PCNA蛋白的錶達量,抑製HeLa細胞的增殖活性,阻滯細胞週期的進行,導緻細胞進入衰老狀態.
목적 건립MORF4기인고표체유도HeLa세포쇠로모형,탐색MORF4기인대HeLa세포쇠로적영향.방법 분별장pcDNA3.1(+ )/Flag-MORF4화pcDNA3.1(+)공재질립전염인궁경암HeLa세포주.SA-β-Gal염색검측세포쇠로,MTT법급류식세포술검측세포주기변화급세포적증식활력,량자공동학정MG-132처리적최괄조건.Western인적검측MORF4、PCNA기인적표체.결과 질립경매절화측서감정,증명pcDNA3.1(+ )/Flag-MORF4질립중함유목적기인서렬；경농도제도l.25、2.5、5、10 μmol/L MG-132처리전염세포2、4、24、48 h후,SA-β-Gal염색화MTT 검측결과현시10 μmol/L MG-132처리24 h적전염세포명현쇠로,세포활력강저；세포주기피조체재Go/G1기,S기세포명현감소,증식수도억제；Western인적검측결과현시MORF4단백재세포중적함량명현승고,이여증식상관기인PCNA표체하조.결론 구건적pcDNA3.1(+)/Flag-MORF4 질립재HeLa세포중표체；병재MG-132작용하,사MORF4기인적표체산물적루,종이영향PCNA단백적표체량,억제HeLa세포적증식활성,조체세포주기적진행,도치세포진입쇠로상태.
