军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2012年
9期
658-661,672
,共5页
韩伟%谭亚芳%杨慧盈%郭兆彪%杨瑞馥%伏小平%杜宗敏
韓偉%譚亞芳%楊慧盈%郭兆彪%楊瑞馥%伏小平%杜宗敏
한위%담아방%양혜영%곽조표%양서복%복소평%두종민
鼠疫耶尔森菌%T3SS%β-内酰胺酶报告基因%质粒%聚合酶链反应
鼠疫耶爾森菌%T3SS%β-內酰胺酶報告基因%質粒%聚閤酶鏈反應
서역야이삼균%T3SS%β-내선알매보고기인%질립%취합매련반응
目的 构建鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)Ⅲ型分泌系统(T3SS)相关蛋白β-内酰胺酶(TEM-1 β-lactamases,Bla)报告基因载体,旨在运用本系统检测鼠疫菌待测蛋白能否转运至宿主细胞内.方法 将TEM基因克隆入pA-CYC184载体中,构建用于鼠疫茵研究的TEM报告基因载体.把待分析的鼠疫菌基因及启动子区克隆入TEM基因上游,使鼠疫菌蛋白与TEM蛋白融合表达.将鼠疫菌基因-TEM融合表达载体电转化到鼠疫菌中,并感染HeLa细胞2h后,加入CCF2-AM底物,在激光共聚焦显微镜下观察结果.结果与结论 应用本系统检测了YopK-Bla、YscK-Bla、YscL-Bla和YscX-Bla进入宿主细胞的情况,YopK-Bla和YscX-Bla菌株感染的HeLa细胞呈蓝色,YscK-Bla和YscL-Bla菌株感染的HeLa细胞呈绿色,表明YopK及YscX可以进入宿主细胞,而YscK和YscL则不能.本研究成功地构建了适于鼠疫菌的TEM报告基因系统,该系统可作为分析其他鼠疫菌蛋白能否在感染的过程中进入宿主细胞的工具,为鼠疫菌T3SS相关蛋白致病机制研究奠定了基础.
目的 構建鼠疫耶爾森菌(鼠疫菌)Ⅲ型分泌繫統(T3SS)相關蛋白β-內酰胺酶(TEM-1 β-lactamases,Bla)報告基因載體,旨在運用本繫統檢測鼠疫菌待測蛋白能否轉運至宿主細胞內.方法 將TEM基因剋隆入pA-CYC184載體中,構建用于鼠疫茵研究的TEM報告基因載體.把待分析的鼠疫菌基因及啟動子區剋隆入TEM基因上遊,使鼠疫菌蛋白與TEM蛋白融閤錶達.將鼠疫菌基因-TEM融閤錶達載體電轉化到鼠疫菌中,併感染HeLa細胞2h後,加入CCF2-AM底物,在激光共聚焦顯微鏡下觀察結果.結果與結論 應用本繫統檢測瞭YopK-Bla、YscK-Bla、YscL-Bla和YscX-Bla進入宿主細胞的情況,YopK-Bla和YscX-Bla菌株感染的HeLa細胞呈藍色,YscK-Bla和YscL-Bla菌株感染的HeLa細胞呈綠色,錶明YopK及YscX可以進入宿主細胞,而YscK和YscL則不能.本研究成功地構建瞭適于鼠疫菌的TEM報告基因繫統,該繫統可作為分析其他鼠疫菌蛋白能否在感染的過程中進入宿主細胞的工具,為鼠疫菌T3SS相關蛋白緻病機製研究奠定瞭基礎.
목적 구건서역야이삼균(서역균)Ⅲ형분비계통(T3SS)상관단백β-내선알매(TEM-1 β-lactamases,Bla)보고기인재체,지재운용본계통검측서역균대측단백능부전운지숙주세포내.방법 장TEM기인극륭입pA-CYC184재체중,구건용우서역인연구적TEM보고기인재체.파대분석적서역균기인급계동자구극륭입TEM기인상유,사서역균단백여TEM단백융합표체.장서역균기인-TEM융합표체재체전전화도서역균중,병감염HeLa세포2h후,가입CCF2-AM저물,재격광공취초현미경하관찰결과.결과여결론 응용본계통검측료YopK-Bla、YscK-Bla、YscL-Bla화YscX-Bla진입숙주세포적정황,YopK-Bla화YscX-Bla균주감염적HeLa세포정람색,YscK-Bla화YscL-Bla균주감염적HeLa세포정록색,표명YopK급YscX가이진입숙주세포,이YscK화YscL칙불능.본연구성공지구건료괄우서역균적TEM보고기인계통,해계통가작위분석기타서역균단백능부재감염적과정중진입숙주세포적공구,위서역균T3SS상관단백치병궤제연구전정료기출.
