中华烧伤杂志
中華燒傷雜誌
중화소상잡지
16
2007年
2期
100-103
,共4页
董燕%丁国富%李斌%和生琦%颜伟%周红%王仙园
董燕%丁國富%李斌%和生琦%顏偉%週紅%王仙園
동연%정국부%리빈%화생기%안위%주홍%왕선완
青霉素结合蛋白质类%克隆,分子%基因表达%甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌
青黴素結閤蛋白質類%剋隆,分子%基因錶達%甲氧西林耐藥金黃色葡萄毬菌
청매소결합단백질류%극륭,분자%기인표체%갑양서림내약금황색포도구균
目的 应用基因重组技术对编码甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的mecA基因片段进行克隆、表达. 方法从临床样本中分离鉴定出MRSA,根据基因文库收录的mecA基因编码序列,针对编码PBP2a第25～668位氨基酸的mecA基因片段设计引物,扩增目的基因片段,克隆至pQE30载体,经酶切鉴定、测序后,再转化E.coli M15(pREP4).采用1 mmol/L的异丙硫半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达及鉴定.结果 重组表达质粒pQE30-mecA构建成功,基因测序结果显示,扩增的mecA基因DNA片段全长为1932 bp,其中有9个碱基突变.IPTG诱导后6 h,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,M15(pQE30-mecA)出现一条相对分子质量约74×103的蛋白条带,且一部分以可溶性形式存在;M15(pQE30)未出现特异性蛋白条带.经诱导表达和鉴定证实,表达出的可溶性目的蛋白为PBP2a.结论 利用本技术可成功表达MRSA临床分离株中的可溶性PBP2a.
目的 應用基因重組技術對編碼甲氧西林耐藥金黃色葡萄毬菌(MRSA)臨床分離株青黴素結閤蛋白2a(PBP2a)的mecA基因片段進行剋隆、錶達. 方法從臨床樣本中分離鑒定齣MRSA,根據基因文庫收錄的mecA基因編碼序列,針對編碼PBP2a第25～668位氨基痠的mecA基因片段設計引物,擴增目的基因片段,剋隆至pQE30載體,經酶切鑒定、測序後,再轉化E.coli M15(pREP4).採用1 mmol/L的異丙硫半乳糖苷(IPTG)進行誘導錶達及鑒定.結果 重組錶達質粒pQE30-mecA構建成功,基因測序結果顯示,擴增的mecA基因DNA片段全長為1932 bp,其中有9箇堿基突變.IPTG誘導後6 h,聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示,M15(pQE30-mecA)齣現一條相對分子質量約74×103的蛋白條帶,且一部分以可溶性形式存在;M15(pQE30)未齣現特異性蛋白條帶.經誘導錶達和鑒定證實,錶達齣的可溶性目的蛋白為PBP2a.結論 利用本技術可成功錶達MRSA臨床分離株中的可溶性PBP2a.
목적 응용기인중조기술대편마갑양서림내약금황색포도구균(MRSA)림상분리주청매소결합단백2a(PBP2a)적mecA기인편단진행극륭、표체. 방법종림상양본중분리감정출MRSA,근거기인문고수록적mecA기인편마서렬,침대편마PBP2a제25～668위안기산적mecA기인편단설계인물,확증목적기인편단,극륭지pQE30재체,경매절감정、측서후,재전화E.coli M15(pREP4).채용1 mmol/L적이병류반유당감(IPTG)진행유도표체급감정.결과 중조표체질립pQE30-mecA구건성공,기인측서결과현시,확증적mecA기인DNA편단전장위1932 bp,기중유9개감기돌변.IPTG유도후6 h,취병희선알응효전영현시,M15(pQE30-mecA)출현일조상대분자질량약74×103적단백조대,차일부분이가용성형식존재;M15(pQE30)미출현특이성단백조대.경유도표체화감정증실,표체출적가용성목적단백위PBP2a.결론 이용본기술가성공표체MRSA림상분리주중적가용성PBP2a.
