中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2005年
8期
45-50
,共6页
辛艳丽%贾玉艳%王恒梁%邓继先
辛豔麗%賈玉豔%王恆樑%鄧繼先
신염려%가옥염%왕항량%산계선
细菌人工染色体%λRed重组系统%β-酪蛋白基因%FLP
細菌人工染色體%λRed重組繫統%β-酪蛋白基因%FLP
세균인공염색체%λRed중조계통%β-락단백기인%FLP
采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1 BAC进行快速改构.首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-440C1 BAC菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换.最后利用Zeocin抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将抗性基因剔除.经Southern blot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tPAm-RPCI23-440C1 BAC克隆.
採用Red繫統介導的同源重組方法對含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1 BAC進行快速改構.首先通過PCR方法,穫得兩耑帶有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重組片段,然後將此同源重組片段電擊轉化至已含有編碼Red重組酶質粒的RPCI23-440C1 BAC菌中,在λRed重組繫統的幫助下,通過同源重組片段兩耑與RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌體內與β-酪蛋白基因髮生同源重組,將其置換.最後利用Zeocin抗性基因兩側的FRT位點,通過FLP位點專一性重組將抗性基因剔除.經Southern blot和序列分析鑒定錶明,穫得瞭重組正確且無編碼兩種重組酶質粒的tPAm-RPCI23-440C1 BAC剋隆.
채용Red계통개도적동원중조방법대함유서β-락단백기인적RPCI23-440C1 BAC진행쾌속개구.수선통과PCR방법,획득량단대유서β-락단백기인동원서렬적tPAm-Zeo동원중조편단,연후장차동원중조편단전격전화지이함유편마Red중조매질립적RPCI23-440C1 BAC균중,재λRed중조계통적방조하,통과동원중조편단량단여RPCI23-440C1중β-락단백동원적서렬재균체내여β-락단백기인발생동원중조,장기치환.최후이용Zeocin항성기인량측적FRT위점,통과FLP위점전일성중조장항성기인척제.경Southern blot화서렬분석감정표명,획득료중조정학차무편마량충중조매질립적tPAm-RPCI23-440C1 BAC극륭.
