四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2007年
1期
53-56
,共4页
蒋磊%覃扬%孙芝琳%孙泽芳%王锦红%杨鲁川
蔣磊%覃颺%孫芝琳%孫澤芳%王錦紅%楊魯川
장뢰%담양%손지림%손택방%왕금홍%양로천
半巢式PCR%甲基化敏感性内切酶%人原发性肝癌%P16基因%启动子甲基化
半巢式PCR%甲基化敏感性內切酶%人原髮性肝癌%P16基因%啟動子甲基化
반소식PCR%갑기화민감성내절매%인원발성간암%P16기인%계동자갑기화
目的 建立甲基化敏感的限制性内切酶结合半巢式降落PCR方法,研究原发性肝癌P16基因启动子区甲基化状态.方法 针对P16基因启动子区富含CpG的序列,设计3条引物,进行半巢式降落PCR扩增,检测原发性肝癌P16基因启动子区甲基化状态;并将P16基因启动子区340 bp片段克隆到pMD18-T载体,E.coli JM109扩增此质粒后经CpG甲基化酶M.Sss Ⅰ处理,再用Hpa Ⅱ酶切验证获得P16基因启动子区甲基化阳性的质粒P16Pm+并进行特异性和灵敏度实验.以此甲基化敏感的限制性内切酶结合半巢式降落PCR方法检测40例人原发性肝癌和3例正常人肝组织DNA样品的P16基因启动子区甲基化状态.结果 所采用的Hpa Ⅱ酶切后半巢式PCR方法的特异性强,灵敏度达100 fg;对40例人原发性肝癌组织DNA样品P16基因的启动子区甲基化状态检测显示甲基化阳性率为30%(12/40),3例正常人肝组织均为阴性(0/3).结论 P16抑癌基因启动子区甲基化可能与肝癌发生发展有关.本实验方法简便、成本低廉,并有高度的特异性与灵敏度,在大规模检查中有实际应用价值.
目的 建立甲基化敏感的限製性內切酶結閤半巢式降落PCR方法,研究原髮性肝癌P16基因啟動子區甲基化狀態.方法 針對P16基因啟動子區富含CpG的序列,設計3條引物,進行半巢式降落PCR擴增,檢測原髮性肝癌P16基因啟動子區甲基化狀態;併將P16基因啟動子區340 bp片段剋隆到pMD18-T載體,E.coli JM109擴增此質粒後經CpG甲基化酶M.Sss Ⅰ處理,再用Hpa Ⅱ酶切驗證穫得P16基因啟動子區甲基化暘性的質粒P16Pm+併進行特異性和靈敏度實驗.以此甲基化敏感的限製性內切酶結閤半巢式降落PCR方法檢測40例人原髮性肝癌和3例正常人肝組織DNA樣品的P16基因啟動子區甲基化狀態.結果 所採用的Hpa Ⅱ酶切後半巢式PCR方法的特異性彊,靈敏度達100 fg;對40例人原髮性肝癌組織DNA樣品P16基因的啟動子區甲基化狀態檢測顯示甲基化暘性率為30%(12/40),3例正常人肝組織均為陰性(0/3).結論 P16抑癌基因啟動子區甲基化可能與肝癌髮生髮展有關.本實驗方法簡便、成本低廉,併有高度的特異性與靈敏度,在大規模檢查中有實際應用價值.
목적 건립갑기화민감적한제성내절매결합반소식강락PCR방법,연구원발성간암P16기인계동자구갑기화상태.방법 침대P16기인계동자구부함CpG적서렬,설계3조인물,진행반소식강락PCR확증,검측원발성간암P16기인계동자구갑기화상태;병장P16기인계동자구340 bp편단극륭도pMD18-T재체,E.coli JM109확증차질립후경CpG갑기화매M.Sss Ⅰ처리,재용Hpa Ⅱ매절험증획득P16기인계동자구갑기화양성적질립P16Pm+병진행특이성화령민도실험.이차갑기화민감적한제성내절매결합반소식강락PCR방법검측40례인원발성간암화3례정상인간조직DNA양품적P16기인계동자구갑기화상태.결과 소채용적Hpa Ⅱ매절후반소식PCR방법적특이성강,령민도체100 fg;대40례인원발성간암조직DNA양품P16기인적계동자구갑기화상태검측현시갑기화양성솔위30%(12/40),3례정상인간조직균위음성(0/3).결론 P16억암기인계동자구갑기화가능여간암발생발전유관.본실험방법간편、성본저렴,병유고도적특이성여령민도,재대규모검사중유실제응용개치.
