CAJ | 학술논문

目的:观察微球培养的人脂肪间充质干细胞在特定诱导条件下向软骨细胞的分化情况,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性.方法:实验于2006-03/08在湘雅医院中心实验室完成.①实验材料:皮下脂肪组织来源于股骨颈骨折手术患者6例,对本实验均知情同意.②实验方法:取皮下脂肪,分离培养脂肪间充质干细胞,胰酶消化,取传至第6代的细胞,密度调整为1×1010 L-1进行接种培养,细胞贴附后加入软骨细胞诱导剂(含10 μg/L转化生长因子β1、37.5 mg/L维生素C、6.25 mg/L胰岛素、6.25 mgL转铁蛋白、10-4 mol/L地塞米松、1%新生牛血清的高糖DMEM),倒置显微镜下观察细胞团的变化.③实验评估:诱导14 d后,将细胞吹散,细胞爬片,免疫组化染色检测Ⅱ型胶原的表达,甲苯胺兰染色观察细胞内异染情况,RT-PCR检测Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖aggrecan mRNA的表达.结果:①脂肪间充质干细胞向软骨细胞诱导后的形态:诱导3 d后,细胞团向内呈放射状聚集.②诱导后Ⅱ型胶原的表达及细胞内异染情况:诱导14 d后,Ⅱ型胶原在胞浆、胞膜及细胞外基质中均有表达,呈棕黄色;甲苯胺兰染色显示胞浆内呈蓝色异染.③诱导前后Ⅱ型胶原蛋白和aggrecan mRNA的表达:诱导前脂肪间充质干细胞无Ⅱ型胶原蛋白和aggrecan mRNA表达,而诱导14 d后二者均有较高表达.结论:在微球状态下可成功诱导脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化.
목적:관찰미구배양적인지방간충질간세포재특정유도조건하향연골세포적분화정황,탐토기작위조직공정화연골충자세포적가행성.방법:실험우2006-03/08재상아의원중심실험실완성.①실험재료:피하지방조직래원우고골경골절수술환자6례,대본실험균지정동의.②실험방법:취피하지방,분리배양지방간충질간세포,이매소화,취전지제6대적세포,밀도조정위1×1010 L-1진행접충배양,세포첩부후가입연골세포유도제(함10 μg/L전화생장인자β1、37.5 mg/L유생소C、6.25 mg/L이도소、6.25 mgL전철단백、10-4 mol/L지새미송、1%신생우혈청적고당DMEM),도치현미경하관찰세포단적변화.③실험평고:유도14 d후,장세포취산,세포파편,면역조화염색검측Ⅱ형효원적표체,갑분알란염색관찰세포내이염정황,RT-PCR검측Ⅱ형효원단백화연골단백취당aggrecan mRNA적표체.결과:①지방간충질간세포향연골세포유도후적형태:유도3 d후,세포단향내정방사상취집.②유도후Ⅱ형효원적표체급세포내이염정황:유도14 d후,Ⅱ형효원재포장、포막급세포외기질중균유표체,정종황색;갑분알란염색현시포장내정람색이염.③유도전후Ⅱ형효원단백화aggrecan mRNA적표체:유도전지방간충질간세포무Ⅱ형효원단백화aggrecan mRNA표체,이유도14 d후이자균유교고표체.결론:재미구상태하가성공유도지방간충질간세포향연골세포분화.