川北医学院学报
川北醫學院學報
천북의학원학보
JOURNAL OF NORTH SICHUAN MEDICAL COLLEGE
2008年
1期
22-25
,共4页
胡为民%杨健%唐恩洁%敬保迁%任碧轩
鬍為民%楊健%唐恩潔%敬保遷%任碧軒
호위민%양건%당은길%경보천%임벽헌
S1P1%真核表达载体%HEK293细胞
S1P1%真覈錶達載體%HEK293細胞
S1P1%진핵표체재체%HEK293세포
目的 构建含人I型1-磷酸鞘氨醇受体(SIPI)-全长cDNA序列及HA和/或EGFP标签的真核表达载体,并观察其在HEK293细胞上的表达.方法 合成2条HA寡核苷酸,克隆人S1P1-Myc-EGFP-N1载体.以HA-S1P1-Myc-EGFP-N1为模板,用PCR的方法 扩增HA-S1P1并克隆人pcDNA3.1(+)载体.限制性酶切消化、PCR、测序的方法 鉴定,载体经Polyfect转染入HEK293细胞.G418筛选出稳定细胞株.用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测S1P1在HEK293细胞上的表达.结果 限制性酶切消化、PCR、测序结果 证实载体构建成功.S1P1表达在HEK293稳定细胞株的表面.结论 成功构建带有HA和/或EGFP标签的S1P1真核表达载体,表面表达S1P1的HEK293稳定细胞株可作为我们进一步研究的细胞模型.
目的 構建含人I型1-燐痠鞘氨醇受體(SIPI)-全長cDNA序列及HA和/或EGFP標籤的真覈錶達載體,併觀察其在HEK293細胞上的錶達.方法 閤成2條HA寡覈苷痠,剋隆人S1P1-Myc-EGFP-N1載體.以HA-S1P1-Myc-EGFP-N1為模闆,用PCR的方法 擴增HA-S1P1併剋隆人pcDNA3.1(+)載體.限製性酶切消化、PCR、測序的方法 鑒定,載體經Polyfect轉染入HEK293細胞.G418篩選齣穩定細胞株.用流式細胞儀和激光共聚焦顯微鏡檢測S1P1在HEK293細胞上的錶達.結果 限製性酶切消化、PCR、測序結果 證實載體構建成功.S1P1錶達在HEK293穩定細胞株的錶麵.結論 成功構建帶有HA和/或EGFP標籤的S1P1真覈錶達載體,錶麵錶達S1P1的HEK293穩定細胞株可作為我們進一步研究的細胞模型.
목적 구건함인I형1-린산초안순수체(SIPI)-전장cDNA서렬급HA화/혹EGFP표첨적진핵표체재체,병관찰기재HEK293세포상적표체.방법 합성2조HA과핵감산,극륭인S1P1-Myc-EGFP-N1재체.이HA-S1P1-Myc-EGFP-N1위모판,용PCR적방법 확증HA-S1P1병극륭인pcDNA3.1(+)재체.한제성매절소화、PCR、측서적방법 감정,재체경Polyfect전염입HEK293세포.G418사선출은정세포주.용류식세포의화격광공취초현미경검측S1P1재HEK293세포상적표체.결과 한제성매절소화、PCR、측서결과 증실재체구건성공.S1P1표체재HEK293은정세포주적표면.결론 성공구건대유HA화/혹EGFP표첨적S1P1진핵표체재체,표면표체S1P1적HEK293은정세포주가작위아문진일보연구적세포모형.
