中国现代医学杂志
中國現代醫學雜誌
중국현대의학잡지
CHINA JOURNAL OF MODERN MEDICINE
2008年
3期
275-278,282
,共5页
吴映雅%谭宇蕙%宁异真%杜标炎%李杰芬
吳映雅%譚宇蕙%寧異真%杜標炎%李傑芬
오영아%담우혜%저이진%두표염%리걸분
HSV1-tk/GCV%自杀基因%绿色荧光蛋白%肿瘤
HSV1-tk/GCV%自殺基因%綠色熒光蛋白%腫瘤
HSV1-tk/GCV%자살기인%록색형광단백%종류
目的 建立既有TK活性又表达绿色荧光的融合蛋白治疗系统用于实验研究,为建立荧光活体成像技术,更为科学地进行肿瘤自杀基因增效中药成分的研究打下基础.方法 DNA重组技术构建HSV1-TK cDNA与EGFP基因融合的真核细胞表达裁体pTKGFP,用酶切鉴定并进行序列测定;polyFect转染液对鼠黑色素瘤细胞B16进行转染,荧光显微镜观察基因表达情况,MTT法检测转化细胞B16对GCV的敏感性.结果 重组质粒pTKGFP经限制性酶切鉴定和DNA序列测定分析显示,TK基因已经成功与GFP基因连接.连接处无移码突变产生;荧光显微镜下观察显示,TK-GFP融合基因在B16中获得表达.其在细胞中的定位与文献资料一致,TKGFP主要集中于胞核区而GFP弥散分布于胞质中.TKGFP组细胞对GCV的敏感性大于对照组细胞,差异有显著性.结论 构建了pTKGFP融合蛋白基因表达裁体,并成功在B16中进行表达,所表达的融合蛋白具有TK活性和GFP的荧光活性,可用于后续性的体外与体内实验.
目的 建立既有TK活性又錶達綠色熒光的融閤蛋白治療繫統用于實驗研究,為建立熒光活體成像技術,更為科學地進行腫瘤自殺基因增效中藥成分的研究打下基礎.方法 DNA重組技術構建HSV1-TK cDNA與EGFP基因融閤的真覈細胞錶達裁體pTKGFP,用酶切鑒定併進行序列測定;polyFect轉染液對鼠黑色素瘤細胞B16進行轉染,熒光顯微鏡觀察基因錶達情況,MTT法檢測轉化細胞B16對GCV的敏感性.結果 重組質粒pTKGFP經限製性酶切鑒定和DNA序列測定分析顯示,TK基因已經成功與GFP基因連接.連接處無移碼突變產生;熒光顯微鏡下觀察顯示,TK-GFP融閤基因在B16中穫得錶達.其在細胞中的定位與文獻資料一緻,TKGFP主要集中于胞覈區而GFP瀰散分佈于胞質中.TKGFP組細胞對GCV的敏感性大于對照組細胞,差異有顯著性.結論 構建瞭pTKGFP融閤蛋白基因錶達裁體,併成功在B16中進行錶達,所錶達的融閤蛋白具有TK活性和GFP的熒光活性,可用于後續性的體外與體內實驗.
목적 건립기유TK활성우표체록색형광적융합단백치료계통용우실험연구,위건립형광활체성상기술,경위과학지진행종류자살기인증효중약성분적연구타하기출.방법 DNA중조기술구건HSV1-TK cDNA여EGFP기인융합적진핵세포표체재체pTKGFP,용매절감정병진행서렬측정;polyFect전염액대서흑색소류세포B16진행전염,형광현미경관찰기인표체정황,MTT법검측전화세포B16대GCV적민감성.결과 중조질립pTKGFP경한제성매절감정화DNA서렬측정분석현시,TK기인이경성공여GFP기인련접.련접처무이마돌변산생;형광현미경하관찰현시,TK-GFP융합기인재B16중획득표체.기재세포중적정위여문헌자료일치,TKGFP주요집중우포핵구이GFP미산분포우포질중.TKGFP조세포대GCV적민감성대우대조조세포,차이유현저성.결론 구건료pTKGFP융합단백기인표체재체,병성공재B16중진행표체,소표체적융합단백구유TK활성화GFP적형광활성,가용우후속성적체외여체내실험.
