眼科新进展
眼科新進展
안과신진전
RECENT ADVANCES IN OPHTHALMOLOGY
2008年
6期
412-415
,共4页
司艳芳%王凤翔%何守志%吕杨%张娟美%黄倩香
司豔芳%王鳳翔%何守誌%呂楊%張娟美%黃倩香
사염방%왕봉상%하수지%려양%장연미%황천향
小干扰RNA%视网膜色素上皮细胞%缝隙连接蛋白43
小榦擾RNA%視網膜色素上皮細胞%縫隙連接蛋白43
소간우RNA%시망막색소상피세포%봉극련접단백43
目的 观察体外化学合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对原代培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞缝隙连接蛋白43(connexin43,cx43)基因和蛋白表达的影响.方法 设计合成针对人ex43基因的小干扰片段(siR-NA1、siRNA2、siRNA3)和1条阴性对照siRNA0,在脂质体的介导下转染培养的人RPE细胞,采用RT-PCR确定最有效的抑制片段;针对siRNA的有效片段,分为不同浓度(50～30nmolO·L-1)转染培养细胞,培养72 h后进行MTT增生试验,观察其对人RPE细胞增生能力的影响,确定最有效的浓度;siRNA转染细胞后,分别培养12 h、24 h、48 h、72 h后进行Weston blot试验.观察不同时间点其对cx43蛋白表达的影响.结果 体外合成的3条siRNA均在一定程度上抑制cx43基因的合成,其中 siRNA1是最有效的抑制片段,根据条带灰度比其抑制率达到72%;siRNA1可以显著促进人RPE细胞的增生,增生率达到146%;明显抑制其cx43蛋白的表达(P<0.01),抑制率达到61%;从浓度组间结果可以看出,siRNA的最佳作用浓度是250 nmol·L-1,在此浓度之前效率与浓度呈正比,超过此浓度后各浓度组间差异无统计学意义;比较不同时间点,siRNA转染人RPE细胞24 h后开始抑制cx43表达,48 h后对cx43蛋白合成抑制率最明显.结论 化学合成的siRNA可以有效抑制培养的人RPE细胞cx43基因的表达,促进细胞的增生.这种基因沉默作用可能对于视网膜色素上皮组织的再生有一定作用.
目的 觀察體外化學閤成的小榦擾RNA(small interfering RNA,siRNA)對原代培養的人視網膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細胞縫隙連接蛋白43(connexin43,cx43)基因和蛋白錶達的影響.方法 設計閤成針對人ex43基因的小榦擾片段(siR-NA1、siRNA2、siRNA3)和1條陰性對照siRNA0,在脂質體的介導下轉染培養的人RPE細胞,採用RT-PCR確定最有效的抑製片段;針對siRNA的有效片段,分為不同濃度(50～30nmolO·L-1)轉染培養細胞,培養72 h後進行MTT增生試驗,觀察其對人RPE細胞增生能力的影響,確定最有效的濃度;siRNA轉染細胞後,分彆培養12 h、24 h、48 h、72 h後進行Weston blot試驗.觀察不同時間點其對cx43蛋白錶達的影響.結果 體外閤成的3條siRNA均在一定程度上抑製cx43基因的閤成,其中 siRNA1是最有效的抑製片段,根據條帶灰度比其抑製率達到72%;siRNA1可以顯著促進人RPE細胞的增生,增生率達到146%;明顯抑製其cx43蛋白的錶達(P<0.01),抑製率達到61%;從濃度組間結果可以看齣,siRNA的最佳作用濃度是250 nmol·L-1,在此濃度之前效率與濃度呈正比,超過此濃度後各濃度組間差異無統計學意義;比較不同時間點,siRNA轉染人RPE細胞24 h後開始抑製cx43錶達,48 h後對cx43蛋白閤成抑製率最明顯.結論 化學閤成的siRNA可以有效抑製培養的人RPE細胞cx43基因的錶達,促進細胞的增生.這種基因沉默作用可能對于視網膜色素上皮組織的再生有一定作用.
목적 관찰체외화학합성적소간우RNA(small interfering RNA,siRNA)대원대배양적인시망막색소상피(retinal pigment epithelium,RPE)세포봉극련접단백43(connexin43,cx43)기인화단백표체적영향.방법 설계합성침대인ex43기인적소간우편단(siR-NA1、siRNA2、siRNA3)화1조음성대조siRNA0,재지질체적개도하전염배양적인RPE세포,채용RT-PCR학정최유효적억제편단;침대siRNA적유효편단,분위불동농도(50～30nmolO·L-1)전염배양세포,배양72 h후진행MTT증생시험,관찰기대인RPE세포증생능력적영향,학정최유효적농도;siRNA전염세포후,분별배양12 h、24 h、48 h、72 h후진행Weston blot시험.관찰불동시간점기대cx43단백표체적영향.결과 체외합성적3조siRNA균재일정정도상억제cx43기인적합성,기중 siRNA1시최유효적억제편단,근거조대회도비기억제솔체도72%;siRNA1가이현저촉진인RPE세포적증생,증생솔체도146%;명현억제기cx43단백적표체(P<0.01),억제솔체도61%;종농도조간결과가이간출,siRNA적최가작용농도시250 nmol·L-1,재차농도지전효솔여농도정정비,초과차농도후각농도조간차이무통계학의의;비교불동시간점,siRNA전염인RPE세포24 h후개시억제cx43표체,48 h후대cx43단백합성억제솔최명현.결론 화학합성적siRNA가이유효억제배양적인RPE세포cx43기인적표체,촉진세포적증생.저충기인침묵작용가능대우시망막색소상피조직적재생유일정작용.
