农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2008年
5期
770-774
,共5页
郑喜邦%云彦%胡勇策%王华岩%窦忠英
鄭喜邦%雲彥%鬍勇策%王華巖%竇忠英
정희방%운언%호용책%왕화암%두충영
nanog%分子克隆%原核表达%牛
nanog%分子剋隆%原覈錶達%牛
nanog%분자극륭%원핵표체%우
从6周龄的胎牛(Bos taurus)原始生殖嵴中提取总RNA,通过RT-PCR扩增nanog基因,将其克隆到PMD-18T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体上,获得原核表达质粒pGEx-KG-nanog,限制性内切酶分析和DNA测序证明所插入片段为牛nanog基因编码序列.重组质粒转化大肠杆菌JM109(Escherichia coli),在不同的培养温度(25、30和37℃)和不同浓度的IPTG(0.10、0.25、0.50、1.00和2.00mmol/L)诱导下均获得了表达,结果表明,培养温度和IPTG浓度对GST-Nanog融合蛋白在大肠杆菌中的表达影响甚微;经Western blot检测证实该蛋白约60kD,并具有GST抗原活性,证实目的蛋白为Nanog蛋白.
從6週齡的胎牛(Bos taurus)原始生殖嵴中提取總RNA,通過RT-PCR擴增nanog基因,將其剋隆到PMD-18T載體,然後再亞剋隆到pGEX-KG錶達載體上,穫得原覈錶達質粒pGEx-KG-nanog,限製性內切酶分析和DNA測序證明所插入片段為牛nanog基因編碼序列.重組質粒轉化大腸桿菌JM109(Escherichia coli),在不同的培養溫度(25、30和37℃)和不同濃度的IPTG(0.10、0.25、0.50、1.00和2.00mmol/L)誘導下均穫得瞭錶達,結果錶明,培養溫度和IPTG濃度對GST-Nanog融閤蛋白在大腸桿菌中的錶達影響甚微;經Western blot檢測證實該蛋白約60kD,併具有GST抗原活性,證實目的蛋白為Nanog蛋白.
종6주령적태우(Bos taurus)원시생식척중제취총RNA,통과RT-PCR확증nanog기인,장기극륭도PMD-18T재체,연후재아극륭도pGEX-KG표체재체상,획득원핵표체질립pGEx-KG-nanog,한제성내절매분석화DNA측서증명소삽입편단위우nanog기인편마서렬.중조질립전화대장간균JM109(Escherichia coli),재불동적배양온도(25、30화37℃)화불동농도적IPTG(0.10、0.25、0.50、1.00화2.00mmol/L)유도하균획득료표체,결과표명,배양온도화IPTG농도대GST-Nanog융합단백재대장간균중적표체영향심미;경Western blot검측증실해단백약60kD,병구유GST항원활성,증실목적단백위Nanog단백.
