经济林研究
經濟林研究
경제림연구
ECONOMIC FOREST RESEARCHES
2009年
1期
1-6
,共6页
曾斌%罗淑萍%李疆%程运江%廖康
曾斌%囉淑萍%李疆%程運江%廖康
증빈%라숙평%리강%정운강%료강
新疆野扁桃%硅胶保存%基因组DNA%SSR反应体系
新疆野扁桃%硅膠保存%基因組DNA%SSR反應體繫
신강야편도%규효보존%기인조DNA%SSR반응체계
对硅胶干燥保存制备新疆野扁桃DNA样品和SSR反应体系优化进行了研究.结果表明:在室温下贮存3个月、6个月、9个月、1年和2年的硅胶干燥的同一野扁桃叶片材料中采用改进的CTAB法提取了高质量的基因组总DNA.较好的克服了野扁桃叶片中含有较高的多糖、多酚、色素以及单宁等次生物质的影响.通过A2s0/A280,琼脂糖凝胶电泳和PCR-SSR扩增结果分析对提取的基因组DNA进行了鉴定,2年内不同保存时期的同一材料对于DNA提取没有明显差异,提取的DNA用于SSR扩增所得的扩增产物也均无明显差异;确立野扁桃最佳的PCR-SSR反应体系是30～50 ng DNA模板,0.5UTaqDNA聚合酶,2.0mmol·L-1MgCl2,0.2 mmol·L-1dNTPs,0.2 mmol·L-1的引物,10×Taq酶配套缓冲液(pH 8.0),反应终体积20uL,引物最佳退火温度为54～57C.利用40个野扁桃随机叶样验证此反应体系,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在200～600 bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好.
對硅膠榦燥保存製備新疆野扁桃DNA樣品和SSR反應體繫優化進行瞭研究.結果錶明:在室溫下貯存3箇月、6箇月、9箇月、1年和2年的硅膠榦燥的同一野扁桃葉片材料中採用改進的CTAB法提取瞭高質量的基因組總DNA.較好的剋服瞭野扁桃葉片中含有較高的多糖、多酚、色素以及單寧等次生物質的影響.通過A2s0/A280,瓊脂糖凝膠電泳和PCR-SSR擴增結果分析對提取的基因組DNA進行瞭鑒定,2年內不同保存時期的同一材料對于DNA提取沒有明顯差異,提取的DNA用于SSR擴增所得的擴增產物也均無明顯差異;確立野扁桃最佳的PCR-SSR反應體繫是30～50 ng DNA模闆,0.5UTaqDNA聚閤酶,2.0mmol·L-1MgCl2,0.2 mmol·L-1dNTPs,0.2 mmol·L-1的引物,10×Taq酶配套緩遲液(pH 8.0),反應終體積20uL,引物最佳退火溫度為54～57C.利用40箇野扁桃隨機葉樣驗證此反應體繫,變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測結果顯示,擴增產物在200～600 bp,多態性高,且反應體繫的穩定性和可重複性好.
대규효간조보존제비신강야편도DNA양품화SSR반응체계우화진행료연구.결과표명:재실온하저존3개월、6개월、9개월、1년화2년적규효간조적동일야편도협편재료중채용개진적CTAB법제취료고질량적기인조총DNA.교호적극복료야편도협편중함유교고적다당、다분、색소이급단저등차생물질적영향.통과A2s0/A280,경지당응효전영화PCR-SSR확증결과분석대제취적기인조DNA진행료감정,2년내불동보존시기적동일재료대우DNA제취몰유명현차이,제취적DNA용우SSR확증소득적확증산물야균무명현차이;학립야편도최가적PCR-SSR반응체계시30～50 ng DNA모판,0.5UTaqDNA취합매,2.0mmol·L-1MgCl2,0.2 mmol·L-1dNTPs,0.2 mmol·L-1적인물,10×Taq매배투완충액(pH 8.0),반응종체적20uL,인물최가퇴화온도위54～57C.이용40개야편도수궤협양험증차반응체계,변성취병희선알응효전영검측결과현시,확증산물재200～600 bp,다태성고,차반응체계적은정성화가중복성호.
