浙江医学
浙江醫學
절강의학
ZHEJIANG MEDICAL JOURNAL
2009年
5期
604-605,717
,共3页
胡宏平%赵群益%戴金华%朱亚芬
鬍宏平%趙群益%戴金華%硃亞芬
호굉평%조군익%대금화%주아분
抗菌肽%表达%3型碳水化合物结合分子
抗菌肽%錶達%3型碳水化閤物結閤分子
항균태%표체%3형탄수화합물결합분자
目的 构建抗菌肽-23与3型碳水化合物结合分子(CBM3)融合蛋白的原核表达载体并进行诱导表达、纯化和鉴定.方法 PCR扩增PMAP-23-LK-CBM3融合蛋白,产物经酶切、纯化、回收后与经同样双酶切并回收后的pET21a原核表达载体相连接,连接产物转化感受态DH5α菌,经菌落PCR筛选出阳性菌落并提取质粒进行初步酶切鉴定后进一步行双向测序鉴定,插入序列完全正确者命名为pET21a-PMAP-23-LK-CBM3重组载体,并将其转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),加入IPTG诱导PMAP-23-LK-CBM3融合蛋白表达后提取菌体蛋白行亲和层析纯化,并对纯化产物进行SDS-PAGE鉴定和Western Blot鉴定.结果 成功构建了pET21a-PMAP-23-LK-CBM3融合重组质粒,成功诱导、纯化并鉴定出PMAP-23-LK-CBM3融合蛋白,分子量与理论值相符.结论 成功表达并纯化、鉴定出了PMAP-23-LK-CBM3融合蛋白,为进一步将其应用于抗菌机制和药理实验的研究奠定了基础.
目的 構建抗菌肽-23與3型碳水化閤物結閤分子(CBM3)融閤蛋白的原覈錶達載體併進行誘導錶達、純化和鑒定.方法 PCR擴增PMAP-23-LK-CBM3融閤蛋白,產物經酶切、純化、迴收後與經同樣雙酶切併迴收後的pET21a原覈錶達載體相連接,連接產物轉化感受態DH5α菌,經菌落PCR篩選齣暘性菌落併提取質粒進行初步酶切鑒定後進一步行雙嚮測序鑒定,插入序列完全正確者命名為pET21a-PMAP-23-LK-CBM3重組載體,併將其轉化感受態大腸埃希菌BL21(DE3),加入IPTG誘導PMAP-23-LK-CBM3融閤蛋白錶達後提取菌體蛋白行親和層析純化,併對純化產物進行SDS-PAGE鑒定和Western Blot鑒定.結果 成功構建瞭pET21a-PMAP-23-LK-CBM3融閤重組質粒,成功誘導、純化併鑒定齣PMAP-23-LK-CBM3融閤蛋白,分子量與理論值相符.結論 成功錶達併純化、鑒定齣瞭PMAP-23-LK-CBM3融閤蛋白,為進一步將其應用于抗菌機製和藥理實驗的研究奠定瞭基礎.
목적 구건항균태-23여3형탄수화합물결합분자(CBM3)융합단백적원핵표체재체병진행유도표체、순화화감정.방법 PCR확증PMAP-23-LK-CBM3융합단백,산물경매절、순화、회수후여경동양쌍매절병회수후적pET21a원핵표체재체상련접,련접산물전화감수태DH5α균,경균락PCR사선출양성균락병제취질립진행초보매절감정후진일보행쌍향측서감정,삽입서렬완전정학자명명위pET21a-PMAP-23-LK-CBM3중조재체,병장기전화감수태대장애희균BL21(DE3),가입IPTG유도PMAP-23-LK-CBM3융합단백표체후제취균체단백행친화층석순화,병대순화산물진행SDS-PAGE감정화Western Blot감정.결과 성공구건료pET21a-PMAP-23-LK-CBM3융합중조질립,성공유도、순화병감정출PMAP-23-LK-CBM3융합단백,분자량여이론치상부.결론 성공표체병순화、감정출료PMAP-23-LK-CBM3융합단백,위진일보장기응용우항균궤제화약리실험적연구전정료기출.
