中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2009年
5期
333-336,355
,共5页
亓文宝%叶贺佳%张文炎%焦培荣%樊惠英%张桂红%廖明
亓文寶%葉賀佳%張文炎%焦培榮%樊惠英%張桂紅%廖明
기문보%협하가%장문염%초배영%번혜영%장계홍%료명
H1 亚型猪流感病毒%HA基因%序列分析%重组腺病毒
H1 亞型豬流感病毒%HA基因%序列分析%重組腺病毒
H1 아형저류감병독%HA기인%서렬분석%중조선병독
本研究对猪流感病毒A/Swine/Guangdong/3/2003(H1N1)株(SIV-GD03株)的HA基因序列进行了遗传演化分析,结果表明SIV-GD03株与GenBank中登录的全部192株H1亚型SIV中的151株核苷酸序列相似性达到85%以上,表明该毒株具有作为疫苗候选株的分子特征.将SIV-GD03的HA基因克隆到腺病毒穿梭载体pAd-CMV5-IRES-GFP中,将得到的重组穿梭质粒pAd-H1-IRES-GFP电转化至BJ5183感受态细胞中,与人5型腺病毒骨架质粒同源重组获得重组腺病毒质粒prAd-H1-IRES-GFP,该质粒线性化后转染AD-293细胞.包装出的重组腺病毒rAd-H1HA-GFP通过荧光显微镜观察、PCR和western blot鉴定,证明HA基因和GFP基因在重组腺病毒中得到高效表达,该毒株在AD-293细胞上连续传12代后表现出较好的整合稳定性及传代稳定性.
本研究對豬流感病毒A/Swine/Guangdong/3/2003(H1N1)株(SIV-GD03株)的HA基因序列進行瞭遺傳縯化分析,結果錶明SIV-GD03株與GenBank中登錄的全部192株H1亞型SIV中的151株覈苷痠序列相似性達到85%以上,錶明該毒株具有作為疫苗候選株的分子特徵.將SIV-GD03的HA基因剋隆到腺病毒穿梭載體pAd-CMV5-IRES-GFP中,將得到的重組穿梭質粒pAd-H1-IRES-GFP電轉化至BJ5183感受態細胞中,與人5型腺病毒骨架質粒同源重組穫得重組腺病毒質粒prAd-H1-IRES-GFP,該質粒線性化後轉染AD-293細胞.包裝齣的重組腺病毒rAd-H1HA-GFP通過熒光顯微鏡觀察、PCR和western blot鑒定,證明HA基因和GFP基因在重組腺病毒中得到高效錶達,該毒株在AD-293細胞上連續傳12代後錶現齣較好的整閤穩定性及傳代穩定性.
본연구대저류감병독A/Swine/Guangdong/3/2003(H1N1)주(SIV-GD03주)적HA기인서렬진행료유전연화분석,결과표명SIV-GD03주여GenBank중등록적전부192주H1아형SIV중적151주핵감산서렬상사성체도85%이상,표명해독주구유작위역묘후선주적분자특정.장SIV-GD03적HA기인극륭도선병독천사재체pAd-CMV5-IRES-GFP중,장득도적중조천사질립pAd-H1-IRES-GFP전전화지BJ5183감수태세포중,여인5형선병독골가질립동원중조획득중조선병독질립prAd-H1-IRES-GFP,해질립선성화후전염AD-293세포.포장출적중조선병독rAd-H1HA-GFP통과형광현미경관찰、PCR화western blot감정,증명HA기인화GFP기인재중조선병독중득도고효표체,해독주재AD-293세포상련속전12대후표현출교호적정합은정성급전대은정성.
