CAJ | 학술논문

为确定嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)AS1.927株外膜蛋白(OMP)的原核表达产物是否具有抗原性及其对小鼠的免疫保护力.本研究根据GenBank上嗜水气单胞菌外膜蛋白ompA基因序列(GenBank登录号:AF146597)设计1对引物,克隆出ompA全长基因1020 bp(GenBank登录号:EU309491),经Sal Ⅰ和Xhol Ⅰ双酶切后连接pET-30a(+),转化大肠杆菌(Escherichia cDli)BL21,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE及Westernblot分析鉴定.结果显示重组基因工程菌E.coli[pET-30a-ompA]表达的融合蛋白分子量约为40.7kD,可以被鼠抗嗜水气单胞菌外膜蛋白抗血清识别.将重组基因工程菌Ecoli[pET-30a-om-pA]口服免疫BALB/c小鼠(Mus mussulus);末次免疫1周后用放射免疫分析小鼠肠粘膜分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平,检测结果揭示,该重组基因工程菌能提高sIgA的分泌(P<0.05);同时在小鼠血清中测出特异性抗体IgG(P<0.05).末次免疫2周后用100 LD50的Ah AS1.927(3.3×105> cfu/mL)腹腔注射攻击小鼠,口服重组菌对小鼠的相对免疫保护力(relative percent survival,RPS)为75%,表明重组基因工程菌可诱导小鼠对AhAS1.927产生一定的免疫保护作用.
위학정기수기단포균(Aeromonas hydrophila,Ah)AS1.927주외막단백(OMP)적원핵표체산물시부구유항원성급기대소서적면역보호력.본연구근거GenBank상기수기단포균외막단백ompA기인서렬(GenBank등록호:AF146597)설계1대인물,극륭출ompA전장기인1020 bp(GenBank등록호:EU309491),경Sal Ⅰ화Xhol Ⅰ쌍매절후련접pET-30a(+),전화대장간균(Escherichia cDli)BL21,IPTG유도표체,병진행SDS-PAGE급Westernblot분석감정.결과현시중조기인공정균E.coli[pET-30a-ompA]표체적융합단백분자량약위40.7kD,가이피서항기수기단포균외막단백항혈청식별.장중조기인공정균Ecoli[pET-30a-om-pA]구복면역BALB/c소서(Mus mussulus);말차면역1주후용방사면역분석소서장점막분비형면역구단백A(sIgA)수평,검측결과게시,해중조기인공정균능제고sIgA적분비(P<0.05);동시재소서혈청중측출특이성항체IgG(P<0.05).말차면역2주후용100 LD50적Ah AS1.927(3.3×105> cfu/mL)복강주사공격소서,구복중조균대소서적상대면역보호력(relative percent survival,RPS)위75%,표명중조기인공정균가유도소서대AhAS1.927산생일정적면역보호작용.