华南国防医学杂志
華南國防醫學雜誌
화남국방의학잡지
MILLITARY MEDICAL JOURNAL OF SOUTH CHINA
2011年
2期
97-100
,共4页
陶鑫%易学瑞%袁有成%刘振扬%张欣蕊%孔祥平
陶鑫%易學瑞%袁有成%劉振颺%張訢蕊%孔祥平
도흠%역학서%원유성%류진양%장흔예%공상평
乙型肝炎病毒%活性氧簇%酒精%细胞模型%原代肝细胞
乙型肝炎病毒%活性氧簇%酒精%細胞模型%原代肝細胞
을형간염병독%활성양족%주정%세포모형%원대간세포
目的 建立复制型HBV-Tg原代肝细胞体外培养方法,观察HBV-Tg小鼠原代肝细胞的氧化应激敏感性.方法 改良的两步灌注法分离、纯化、培养HBV-Tg小鼠原代肝细胞,24孔板培养7天,每天换液,收集上清,检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙氨酸转移酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸转移酶(aspartate transaminase,AST)、白蛋白(albumin,ALB)和病毒学指标HBsAg、HBV-DNA的水平;分离HBV-Tg小鼠与野生型Balb/c鼠肝细胞,培养24h后加不同浓度酒精,于16h后检测两种小鼠原代肝细胞培养上清的AST水平.结果 HBV-Tg小鼠原代肝细胞从铺板第3天开始,LDH、ALT、AST水平达到平衡,膜稳定性恢复正常;在第3～5天ALB水平稳定于较高水平;HBV复制及表达指标(HBsAg、HBV-DNA)在铺板后1～5天能保持较高水平;酒精对原代肝细胞的氧化应激损伤,浓度<2%时,野生型Balb/c鼠肝细胞损伤程度明显低于HBV-Tg小鼠,浓度≥2%时,两种鼠肝细胞的损伤程度相当.结论 复制型HBV-Tg小鼠原代肝细胞培养可以在体外稳定维持肝细胞活性与功能,表达高水平的HBV-DNA和HBsAg,为体外研究乙型肝炎病毒发病机制提供新的模型.
目的 建立複製型HBV-Tg原代肝細胞體外培養方法,觀察HBV-Tg小鼠原代肝細胞的氧化應激敏感性.方法 改良的兩步灌註法分離、純化、培養HBV-Tg小鼠原代肝細胞,24孔闆培養7天,每天換液,收集上清,檢測乳痠脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙氨痠轉移酶(alanine transaminase,ALT)、天鼕氨痠轉移酶(aspartate transaminase,AST)、白蛋白(albumin,ALB)和病毒學指標HBsAg、HBV-DNA的水平;分離HBV-Tg小鼠與野生型Balb/c鼠肝細胞,培養24h後加不同濃度酒精,于16h後檢測兩種小鼠原代肝細胞培養上清的AST水平.結果 HBV-Tg小鼠原代肝細胞從鋪闆第3天開始,LDH、ALT、AST水平達到平衡,膜穩定性恢複正常;在第3～5天ALB水平穩定于較高水平;HBV複製及錶達指標(HBsAg、HBV-DNA)在鋪闆後1～5天能保持較高水平;酒精對原代肝細胞的氧化應激損傷,濃度<2%時,野生型Balb/c鼠肝細胞損傷程度明顯低于HBV-Tg小鼠,濃度≥2%時,兩種鼠肝細胞的損傷程度相噹.結論 複製型HBV-Tg小鼠原代肝細胞培養可以在體外穩定維持肝細胞活性與功能,錶達高水平的HBV-DNA和HBsAg,為體外研究乙型肝炎病毒髮病機製提供新的模型.
목적 건립복제형HBV-Tg원대간세포체외배양방법,관찰HBV-Tg소서원대간세포적양화응격민감성.방법 개량적량보관주법분리、순화、배양HBV-Tg소서원대간세포,24공판배양7천,매천환액,수집상청,검측유산탈경매(lactate dehydrogenase,LDH)、병안산전이매(alanine transaminase,ALT)、천동안산전이매(aspartate transaminase,AST)、백단백(albumin,ALB)화병독학지표HBsAg、HBV-DNA적수평;분리HBV-Tg소서여야생형Balb/c서간세포,배양24h후가불동농도주정,우16h후검측량충소서원대간세포배양상청적AST수평.결과 HBV-Tg소서원대간세포종포판제3천개시,LDH、ALT、AST수평체도평형,막은정성회복정상;재제3～5천ALB수평은정우교고수평;HBV복제급표체지표(HBsAg、HBV-DNA)재포판후1～5천능보지교고수평;주정대원대간세포적양화응격손상,농도<2%시,야생형Balb/c서간세포손상정도명현저우HBV-Tg소서,농도≥2%시,량충서간세포적손상정도상당.결론 복제형HBV-Tg소서원대간세포배양가이재체외은정유지간세포활성여공능,표체고수평적HBV-DNA화HBsAg,위체외연구을형간염병독발병궤제제공신적모형.
