东北农业大学学报
東北農業大學學報
동북농업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
10期
11-15
,共5页
冀志庚%高学军%敖金霞%张明辉%霍楠
冀誌庚%高學軍%敖金霞%張明輝%霍楠
기지경%고학군%오금하%장명휘%곽남
real-time PCR%SYBR Green I%转基因大豆%拷贝数%Lectin%35边界序列
real-time PCR%SYBR Green I%轉基因大豆%拷貝數%Lectin%35邊界序列
real-time PCR%SYBR Green I%전기인대두%고패수%Lectin%35변계서렬
采用SYBR Green I real-time PCR方法检测转基因大豆中外源基因35S边界基因的拷贝数,以大豆凝集素基因(Lectin)作为内参照基因,以转基因大豆基因组DNA为内参照基因标准品,初始浓度为0.43μg·μL-1,进行5倍梯度稀释得到内参照基因CT值与起始模板量的相关性标准曲线:y=-2.9915x+22.3321,R2=0.996；以含35S边界序列的质粒DNA为目的基因为标准品,初始浓度为0.64μg· μL-1,同样进行5倍梯度稀释,建立目的基因CT与起始模板量的相关性标准曲线:y=-3.4021x+ 17.7219,R2=0.999.通过SYBR Green I real-time PCR获得样本中目的基因和内参基因的CT值,将CT值分别代入标准曲线计算该样本中内参基因和目的基因起始模板量,目的基因与内参基因起始模板量比值即是目的基因在该转基因中的拷贝数.计算结果为4份样品中,2个拷贝的1个,3个拷贝的3个.
採用SYBR Green I real-time PCR方法檢測轉基因大豆中外源基因35S邊界基因的拷貝數,以大豆凝集素基因(Lectin)作為內參照基因,以轉基因大豆基因組DNA為內參照基因標準品,初始濃度為0.43μg·μL-1,進行5倍梯度稀釋得到內參照基因CT值與起始模闆量的相關性標準麯線:y=-2.9915x+22.3321,R2=0.996；以含35S邊界序列的質粒DNA為目的基因為標準品,初始濃度為0.64μg· μL-1,同樣進行5倍梯度稀釋,建立目的基因CT與起始模闆量的相關性標準麯線:y=-3.4021x+ 17.7219,R2=0.999.通過SYBR Green I real-time PCR穫得樣本中目的基因和內參基因的CT值,將CT值分彆代入標準麯線計算該樣本中內參基因和目的基因起始模闆量,目的基因與內參基因起始模闆量比值即是目的基因在該轉基因中的拷貝數.計算結果為4份樣品中,2箇拷貝的1箇,3箇拷貝的3箇.
채용SYBR Green I real-time PCR방법검측전기인대두중외원기인35S변계기인적고패수,이대두응집소기인(Lectin)작위내삼조기인,이전기인대두기인조DNA위내삼조기인표준품,초시농도위0.43μg·μL-1,진행5배제도희석득도내삼조기인CT치여기시모판량적상관성표준곡선:y=-2.9915x+22.3321,R2=0.996；이함35S변계서렬적질립DNA위목적기인위표준품,초시농도위0.64μg· μL-1,동양진행5배제도희석,건립목적기인CT여기시모판량적상관성표준곡선:y=-3.4021x+ 17.7219,R2=0.999.통과SYBR Green I real-time PCR획득양본중목적기인화내삼기인적CT치,장CT치분별대입표준곡선계산해양본중내삼기인화목적기인기시모판량,목적기인여내삼기인기시모판량비치즉시목적기인재해전기인중적고패수.계산결과위4빈양품중,2개고패적1개,3개고패적3개.
